亲水性相互作用色谱四极杆串联线性离子阱质谱测定蛋白食品中L羟脯氨酸残留.pdfVIP

第39卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第9期 2011年9月 ChineseJournalof 1373～1379 AnalytiealChemistry DOI：10．3724／SP．J。1096．2011．01373 亲水性相互作用色谱一四极杆串联线性离子阱质谱测定 蛋白食品中L一羟脯氨酸残留 赵善贞1 邓晓军叫 彭涛2 伊雄海1 郭德华1 韩丽1 盛永刚1 吴巧彬3 ’(上海出入境检验检疫局，上海200135)2(中国检验检疫科学研究院，北京100025) 3(上海海洋大学，上海200433) 摘要建立了亲水性相互作用色谱一四极杆串联线性离子阱质谱检测含蛋白食品中的皮革水解蛋白标示物 L一羟脯氨酸(L-HYP)的同时定性与定量分析方法。样品中的L-HYP经酶解后用乙腈沉淀蛋白，．HLB小柱除 去部分脂溶性干扰物，采用液相色谱一质谱进行测定。本方法采用IDA结合EPI模式对试样中的 L-HYP进行定性分析，并建立L—HYP的二级子离子谱库。通过以MRM模式对L-HYP进行定量分析，L—HYP 在12种蛋白食品中平均回收率在73．4％～114．2％(n一6)之间，相对标准偏差在2．5％～14．铴(n=6)之间．可 对试样中的L-HYP在定性确证的同时进行定量分析。 关键词L-羟脯氨酸；亲水性裙互作用色谱；四极杆串联线性离子阱质谱；皮革水解蛋白 1 引 言 皮革水解蛋白是利用皮革、皮鞋下脚料及动物毛发，经水解提炼而生成的一种蛋白。由于水解过程 中添加重铬酸钾和重铬酸钠等重金属盐，具有潜在的致癌和致畸作用，早在2009年就被列入我国“第二 批食品中可能违法添加的非食用物质名单，，f11。不法商贩将皮革水解蛋白添加到乳与含乳食品中，以提 高食品的表观蛋白质含量，对相关食品制造行业和消费者身体健康造成的严重威胁。 皮革水解蛋白多以L-HYP为标示检测物【2～，其检测方法主要有比色法刚、毛细管电泳法【4J、氨基酸分 析仪15]、液相色谱法16,7]及液相色谱／质谱法㈣等。已有液相色谱一串联四极杆质谱测定L—HYP的报道均 为采用选择离子方式检测，方法灵敏度较低；由于羟脯氨酸极性强，采用反相色谱分离时需要进行衍生， 方法繁琐，并且不能完全进行确证；此外，采用反相色谱分离需用离子对试剂增加L-HYP的保留性，因 此色谱和质谱的兼容性较差，无法满足大量样品同时检测的需求。本研究采用亲水性相互作用色谱一四 极杆串联线性离子阱质谱对含蛋白食品中的L—HYP进行定性与定量测定。亲水性相互作用色谱能够 较好地分离多种氨基酸类，方法简便，无需衍生，灵敏度高，同时由于使用高比例的有机相，与质谱具有 良好的兼容性，方法的灵敏度较高；可以满足Ft常检测中大量试样同时检测的需求。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 API4000 Nano Q-TRAP四极杆串联线性离子阱质谱仪(美国AB公司)；SHISEDOSpace高效液相 色谱仪(日本资生堂公司)；Allegra 司)。022岬有机相滤膜(德国CNW公司)。HLB固相萃取小柱(200mL，美国Waters公司)。 mg，3