苦参碱对体外培养人胎肝细胞功能和凋亡的影响.pdfVIP

苦参碱对体外培养人胎肝细胞功能和凋亡的影响 摘 要 目的：在培养基DMEM 中加入不同浓度的苦参碱，对分离后体外培养的胎肝细胞进行干 预，观察胎肝细胞生长情况、 ALB、ALT、UA 的水平、细胞凋亡率和XIAP 的表 达，了解苦参碱对胎肝细胞功能、增殖和凋亡的影响，并探讨其作用机制，为胎肝 细胞永生化研究提供理论依据，为将苦参碱开发成为新型的肝细胞培养液奠定基 础，为进一步探索为生物人工肝和肝细胞移植提供充足的活性肝细胞之可能。 方法：将2mg/L、8mg/L、16mg/L 、32mg/L、64mg/L 的苦参碱加入胎肝细胞培养基DMEM 中，设立DMEM 组为空白对照，分别在12h、18h、 24h 、48h、72h 检测不同浓度 各组细胞的ALB、ALT、UA 水平，采用流式细胞术观察各组细胞凋亡率，通过 RT-PCR 法检测XIAP 的表达。 结果：除64mg/L 组外，其它各组ALB 和UA 含量均高于DMEM 对照组，ALT 含量均低 于DMEM 对照组，提示苦参碱具有保护肝细胞合成和分泌的功能，减轻分离对肝 细胞的损伤，其中以8mg/L 组作用最佳。 除64mg/L 组外，其它各组细胞凋亡率均低于DMEM 对照组，提示苦参碱可抑制 肝细胞凋亡，其中8mg/L 组在各时点凋亡率最低，抗凋亡作用最强。 RT-PCR 法测XIAP 的表达发现，除64mg/L 组外，其它不同浓度各组细胞表达均 高于DMEM 对照组，其中8mg/L 组上调XIAP 表达的作用最强，而苦参碱上调胎 肝细胞XIAP 表达不同于肝肿瘤细胞中XIAP 的持续高表达。 结论：苦参碱具有保护肝细胞合成和分泌的功能，减轻分离对肝细胞的损伤，通过抑制 细胞凋亡，促进细胞增殖，其作用可能是通过上调XIAP 的表达来实现的。 关键字：苦参碱；胎肝细胞；培养；凋亡；XIAP ABSTRACT Objective:We add different concentration of matrine to human fetal hepatocytes culture fluid DMEM, then observe and record fetal hepatocytes III 苦参碱对体外培养人胎肝细胞功能和凋亡的影响 growth 、synthesis fuction、 secretion fuction 、apoptosis and the expression of XIAP to find the better hepatocytes culture fluid in which fetal hepatocytes can maintain activity and grow quickly , in order to establish platform for biological reactor, hepatocyte library and hepatocyte transplantation. Method: We harvest human fetal hepatocytes from fetal human liver, then culture fetal hepatocytes in DMEM added 2mg/L、8mg/L、16mg/L 、 32mg/L and 64mg/L matrine,and detect ALB、ALT 、UA、apoptosis by FCM and the expression of XIAP by RT-PCR at 12h、18h、 24h、48h and72h. Rsult: Except for 64mg/