离子液体双水相中单宁酸与胰蛋白酶的相互作用研究.pdfVIP

第32卷第2期 淮北师范大学学报(自然科学版) Vo1．32 No．2 2011年 6月 JournalofHuaibeiNormalUniversity(NaturalScience) Jun．2011 离子液体双水相中单宁酸与胰蛋白酶的相互作用研究 汤秀琴，邓凡政 (淮北师范大学 化学与材料科学学院，安徽 淮北 235000) 摘 要：运用荧光光谱和紫外光谱，研究在离子液体双水相体系中单宁酸与胰蛋白酶的相互作用．结果表明，TA对 TP 产生荧光猝灭作用，且属于静态猝灭过程．计算得到在298K和310K下的结合常数分别为 1．771×105L·mo卜-和 1．216×10’L·mol～，结合位点数分别为 I_3和 1．2．热力学参数表明TA与TP之间的相互作用力类型为疏水作用． 关键词：单宁酸；胰蛋白酶；荧光猝灭；紫外光谱；离子液体双水相 中图分类号：O613．6 文献标识码：A 文章编号：2095—0691(2011)02—0034—04 单宁酸 (tannicacid，简写 TA)作为传统草药和药方 中的活性成分，具有多种生理活性 ．胰蛋白酶 (trypsin，简写TP)是人和动物肠道中一种重要的消化酶，具有较好的热稳定性．离子液体双水相分相时间 短、粘度低、萃取过程不易乳化、不影响物质的活性、能够提高测定的选择性和灵敏度，且可以回收再利用等 优点，已被广泛应用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域n1．本文采用亲水性离子液体 1一丁基 一3一 甲基溴代咪唑(【Bmim】Br)和 (NH)zsO形成的双水相体系，研究单宁酸与胰蛋白酶的相互作用．药物与蛋白 质的亲和力类型会影响到药物在体 内的分布、清理以及改变血液中游离药物浓度而影响药效[21．通过本文的 研究，将对单宁酸等药物的筛选、改性和临床应用具有一定的指导意义． 1 实验部分 1．1 仪器和试剂 TU一1901双水束紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限公司)；RF一5301PC荧光仪 (日本岛津 公司)．TP溶液：2．0×10I4mol／L；TA溶液：1．0×10 mol／L；离子液体按文献 [3]制备；Britton—Robison缓 冲溶液：pH7．46；(NH)：SO 固体。所用试剂均为分析纯，实验用水为二次去离子水． 1．2 实验方法 在 10mL刻度比色管中分别加入 1．00mL缓冲溶液、1．00mL离子液体和 1．00mL的TP溶液，一定量 的TA溶液，加水定容到6．00mL，再加入固体(NH)：SO摇匀．待分相清晰后取上相于另一比色管中并稀释 到6．00mL．用 1cm石英比色皿，以空白溶液作参比，测荧光光谱及紫外吸收光谱． 2 结果与讨论 2．1 单宁酸与胰蛋 白酶作用的荧光光谱和紫外吸收光谱 TA与TP作用的荧光光谱和紫外吸收光谱如图 1～3．结果表明，(1)单纯离子液相、rA的荧光强度较 小，TA的加人使TP的荧光强度下降，最大吸收峰红移；(2)在测定波长范围内，离子液相、TP的紫外吸光度 较小，TA的加入可使TP的吸光度增大．两种光谱表明，TA与TP之间发生相互作用． 收稿 日期：20l】一O1—20 基金项 目：安徽省教育厅 自然科学研究重点项 月(KJ2008AI23) 作者简介：汤秀琴 (1985一 )，女，湖北宜城人，硕士生，研究方向：孳取分离．通讯作者：邓凡政，男，教授 第2期 汤秀琴等：离子液体双水相中单宁酸与胰蛋白酶的相互作用研究 35 200 Irio 100 SO c】 300 350 100 250 ：{(m 350 ~．／nm A／rim 1．纯离子液相：2．离子