提高O-糖基化水平对CHO—K1细胞突变型tau蛋白过度磷酸化的影响.pdfVIP

山东医药2013年第 53卷第2期 · 基础研究 · 提高 0一糖基化水平对 CHO—K1细胞突变型 tau蛋 白过度磷酸化的影响 王景景 。郑 晨 。丁 楠 ，熊 慧 ，宋金芝 ，赵 纲 ，邓艳秋 (1天津医科大学，天津300070；2天津肿瘤医院) 摘要：目的 观察提高0．糖基化水平对 CHO—K1细胞中突变型R406W tau蛋白过度磷酸化及细胞轴突转运功 能的影响。方法 分别将突变型PSG-5R406Wtau质粒和PSG-5空载体质粒转染 CHO—K1细胞。将成功转染PSG- 5R406Wtau质粒的CHO-K1细胞分为实验组与对照组 ，分别加入20 M的NAG—Ae及等量的DMEM／F12培养基， 转染PSG一5空载体的细胞为空载体组，培养 12h。用Westernblot法检测 tna蛋白表达；免疫印迹法检测实验组与 对照组细胞tau蛋白的糖基化及磷酸化水平；荧光漂 白后恢复技术 (FRAP)检测三组细胞漂 白后荧光恢复的速度以 表示细胞轴突转运速度。结果 转染空载体的细胞未见tna 蛋白表达 ，转染PSG一5tauR406W的细胞tau蛋白呈高 表达。实验组与对照组细胞 O一糖基化水平分别为 1．30±0．09、0．59±0．04(P0．05)。实验组 tauThr205、tauS- er396、tauThr212位点磷酸化水平分别为0．44±0．21…098±0．01、0．44±0．19，对照组分别为 1．11±0．38、1．34± 0．22、0．79±0．05，两组相 比，P均0．05。10、40、70s时实验组荧光强度分别为262．00±12．50、300．00±10．00、 461．66±10．40，对照组分别58．33-4-10．40、131．66±11．54、208．334-14．43，空载体组分别为514．00±10．14、 888．33±11．06、1188．O0±10．60，三组相比，P均0．05。结论 提高CHO-K1细胞的O一糖基化水平有助于减轻突 变型tau蛋白的过度磷酸化水平 ，改善细胞轴突转运功能。 关键词：葡萄糖胺酶抑制剂 ；NAG—Ae；O一糖基化 ；tau蛋白；磷酸化；神经退行性疾病 doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2013．02．009 中图分类号：R741 文献标志码：A 文章编号：1002-266X(2013)02-0025-04 EffectofincreasedO-GIcNAcylationonthehyperphosphorylationinducedbyoverexpression ofmutanttauproteinonCHO-K1cells WANGJ g-jingL，ZHENChert，DINGNan，XIoNGHui，SONGfin—zhi，ZHAOGnng，DENGYan—qiu (1TianjinMedicalUnive~ity，Tianfin300070，P．R．China) Abstract：0bjective Toresearchtheeffectsofincreased0一GlcNAcylationonhyperphosphorylationofmutant R406W tna proteinandfunctionofaxonaltransporton CH0一K1．Methods CHO—K1wereused toestablishthecell， whichwerelineoverexpressingmutantPSG一5R406W tna orPSG-5vectorplasmid．CHO-K1cells，whichweresuccessfully transfeetedplasmidPSG一5 R406W tau，weredividedintoexperimentalandcontrolgroups，treatedwith20 M NAG—Ae andthesalneamountofDMEM／F12culturemedium respectively，culturedfor12h．Western blotwereperformedtodetect thechangeso