栉孔扇贝Chlamys farreri三个性腺发育相关基因的克隆及表达分析.pdf

谨以此论文献给所有帮助过我的老师和同学！ 谨以此论文献给所有帮助过我的老师和同学！ 谨谨以以此此论论文文献献给给所所有有帮帮助助过过我我的的老老师师和和同同学学！！ 王丹 王丹 王王丹丹 栉孔扇贝（Chlamysfarreri）三个性腺发育相关基因的克隆 栉孔扇贝（Chlamysfarreri）三个性腺发育相关基因的克隆 栉栉孔孔扇扇贝贝（（CChhllaammyyssffaarrrreerrii））三三个个性性腺腺发发育育相相关关基基因因的的克克隆隆 及表达分析 及表达分析 及及表表达达分分析析 摘 要 摘 要 摘摘 要要 性腺发育是发育生物学研究的重要领域之一，这是一个多基因参与调控的过 程，并且受到性激素和环境等因素的影响。当前人们对于性激素在性腺发育过程 中的作用已经有了很好的认知，然而，有关性激素活化和灭活的相关分子基础和 机制仅在哺乳动物进行了系统的阐述。贝类是动物界中的重要类群，然而其在性 激素合成和降解领域的研究却相当地不足，一定程度地限制了人们对其性腺发育 Chlamysfarreri 5α- 和调控的理解。本研究以栉孔扇贝（ ）参与雌二醇、 雄烯二醇 5α- -3α 17β- 17β-HSD4 17β-HSD14 和 雄烷 ， 二元醇等激素灭活的 和 为研究对象， 17β-HSD4 17β-HSD14 从栉孔扇贝转录组数据库中筛选出与其它物种 和 高度同源 的两个表达序列标签，采用cDNA末端快速扩增技术（RACE）克隆得到这两个 基因的全长cDNA序列，进一步采用半定量和定量RT-PCR技术，检测了目的基 因在栉孔扇贝各主要组织和不同发育时期性腺中的表达。结果如下： 栉孔扇贝17β-HSD4cDNA 全长为2 417 bp，开放阅读框为2 223 bp，编码 740 SDR 4 17β-HSD4 个氨基酸，推导的氨基酸序列含有 超家族的 个保守区和 3 58 RT-PCR 的 个酶结构域，且与人等脊椎动物的序列相似性均在 ％以上。半定量 显示该基因在栉孔扇贝精巢、卵巢、肌肉、外套膜、鳃、肝胰腺和肾脏等各组织 中均有表达，其中在肝胰腺和肾脏中的表达量明显高于其他组织，暗示栉孔扇贝 多种组织中均可以合成17β-HSD4。定量RT-PCR结果显示，该基因在性腺不同 发育时期的精、卵巢中表达模式不同；并且在生长期和成熟期的精巢中表达量显 P 0.05 著性高于同时期的卵巢（ ＜ ）；暗示该基因对栉孔扇贝精巢发育和成熟的作 β- 用较卵巢更显著，推测该基因可能通过 氧化调节脂类物质的积累，从而影响性 腺发育。 栉孔扇贝17β-HSD14cDNA全长为1154bp，开放阅读框为819bp，可编码 272