口蹄疫病毒非结构蛋白2C基因在昆虫细胞中的表达及应用.pdfVIP

畜牧兽医学报 2011，42(12)：1724—1731 ActaVeterinariaetZootechnicaSinica 口蹄疫病毒非结构蛋 白2C基因在 昆虫 细胞 中的表达及应用 张小丽 ，卢曾军 ，马小军 ，曹轶梅。，付元芳。，刘在新 ，谢庆阁 (1．甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070；2．家畜疫病病原生物学国家重点实验室， 国家 口蹄疫参考实验室，中国农业科学院兰州兽医研究所 ，兰州 730046) 摘 要 ：研究 口蹄疫病毒 (FMDV)非结构蛋 白(NSP)2C在 区分灭活疫苗免疫动物与 自然感染动物方面 的意义 。 本研究将 FMDVNSP2C基因，克隆到穿梭载体 pFast—bac—HT—B，将其转入含骨架载体 Bacmid的DH10Bac，经蓝 白斑筛选得到重组骨架质粒 Bacmid一2C。将 Bacmid一2C转染昆虫细胞 Sf9，鉴定正确后 ，经 3次增殖获得高滴度 的 P一3代病毒后，在 HighFive细胞中进行 目的蛋 白的表达。SDS结果显示在 HighFive细胞中得到了相对分 子质量约为 38．93ku的 目的蛋 白2C，Westernblotting及 Dot-ELISA结果显示 ，该表达产物对 FMDV感染动物 阳 性血清有 良好的反应性。以电泳纯化的2C蛋 白为抗原建立间接 ELISA，检测健康非免疫动物、免疫动物及 FM— DV试验感染动物血清 ，结果表 明2C—ELISA不但能区分免疫动物和感染动物 的血清 ，而且还能检测 FMDV感染 早期动物血清中的2C抗体。说明昆虫细胞表达的2C蛋 白可作为FMDV疫苗免疫动物与 自然感染动物鉴别诊断 的 良好抗原 。2C基 因在 Bac—tO—Bac系统中的成功表达为建立通过检测几种 NSP抗体 ，筛查感染及隐性带毒动物 ， 净化畜群的方法奠定了基础 。 关键词 ：口蹄疫病毒 ；2C基 因；昆虫杆状病毒 ；表达 ；应用 中图分类号：$852．659．6 文献标识码 ：A 文章编号：0366—6964(2O11)12-1724—08 ExpressionofNon-StructuralProtein2C ofFoot-and-mouthDiseaseVirusin InsectCellsandItsApplication ZHANGXiao—li～，LUZeng-jun ，MAXiao-jun，CAOYi—mei。， FU Yuan-fang，LIU Zai-xinz ，XIEQing-ge2 (1．CollegeofVeterinaryMedicine，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China； 2．StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtiologicalBiology，NationalFoot—and-mouthDisease ReferenceLaboratory，LanzhouVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyof AgriculturalSciences，Lanzhou 730046，China) Abstract：Inrecentyears，thepotentialvalueofnonstructuralprotein (NSP)2Cwaswelldocu— mentedfordistinguishingfoot—and—mouthdiseasevirus(FMDV)infectedanimalsfrom vaccinated animals．Inthisstudy，2C geneofFM DV wasclonedintobaculovirustransfervectorpFast—bac— HT—B。andthentherecombinantvectorsweretransformedintoDH1