双自杀基因CD＋TK对胰腺癌BxPC-3细胞的影响.pdf

· 24 · 江西医学院学报 2008年第 48卷第6期 ActaAcademiaeMedicinaeJiangxi2008，Vol48，No6 双 自杀基 因CD+TK对 胰腺癌BxPC一3细胞的影响 张弘英 ，龚 辉 ，谌珊珊 ，朱水山 ，李 军 (南昌大学a．第二附属医院消化 内科 ；b．研究生院医学部 2006级，南昌330006) 摘要 ：目的 探讨逆转录病毒介导的双 自杀基 因对胰腺癌BxPC-3细胞的杀伤作用及胰腺癌的基因治疗方法。 方法 通过脂质体将含有双 自杀基因的逆转录病毒载体 MMIV—CD+TK导入包装细胞PA317，经G418筛选后 大量培养产病毒 的阳性克隆PA317／CD+TK细胞株 ，收集病毒上清液 ，浓缩后转染胰腺癌 BxP 3细胞系，再次经 G418筛选，获得稳定表达双 自杀基因的BxPC-3／CD+TK细胞株。用RT—PCR检测双 自杀基因的表达。给予前 体药物5一氟胞嘧啶(5-flourocytosine，5-FC)和(或)无环鸟苷(Ganciciovir，GCV)后，MTT法测定转基因组及未转基 因组胰腺癌 BxPC一3系细胞的存活率。结果 双 自杀基因在胰腺癌 BxPC一3系细胞中可稳定表达，联合使用 5-FC 和GCV对细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应效果 明显 。结论 逆转录病毒介导 自杀基 因可有效杀死胰腺癌 Bx- PC～3系细胞 ，双 自杀基 因具有更强的抗肿瘤作用。 关键词 ：逆转录病毒；胰腺癌；BxPC-3细胞；基因治疗 中图分类号：R735．9 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—2294(2008)06—0024—04 KillingEffectofCytosineDeaminaseandHSV—TK Double SuicideGenesonPancreaticCarcinoma CellsM ediatedbyRetrovirusVector ZHANG Hong-ying ，GONG Hui，CHEN Shan—shan ，ZHUShui—shan ，LIJun (a．DepartmentofGastroenterology，theSecondAffiliatedHospital； b．2006GradeofMedicalDepartmentofGraduateSchool， NanchangUniversity，Nanchang330006，China) ABSTRACT：Objective Toinvestigatethedifferentkillingeffectsonhumanpancreaticcarcinoma BxPC一3cellswithcytosinedeaminase(CD)andherpessimplexvirus—thymidinekinase(HSV—TK) doublesuicidegenesCO—expressioncomparedwithsinglegenemediatedbyretrovirusvector．To findamoreefficientand low—cytotoxicity suicidegenetherapyforpancreaticcarcinoma．M eth- odsCD andHSV—TK doublesuicidegenesweretransfectedintoBxPC一3cellsusinglipofectamine． ThepositivecloneswerepickedoutandculturedafterG418selection．Theviralsupernatantwas collected．TheBxPC一3cellswereinfectedwiththeviruscontainingthedoublesuicidegenes．Af— terG418selection，RT-PCR wasresortedtodemonstratethesucce