黄瓜花粉管通道法抗虫基因导入及卡那霉素抗性筛选.pdfVIP

n C T ● ^6RICULTURAE 华 北农 学报 ·2008，23(6)：54．57 DOREALI—SIHICll 黄瓜花粉管通道法抗虫基因导入及 卡那霉素抗性筛选 魏爱民，张文珠，杜胜利，韩毅科，张桂华，刘 楠 (天津科润黄瓜研究所 ，天津 300192) 摘要：研究了不同浓度卡那霉素 (Km)对未转化黄瓜种子萌发及幼苗生长的影响，建立了转基因黄瓜卡那霉素抗 性筛选体系。种子首先播在含Km200mg／L的1／2MS培养基中，能有效地抑制黄瓜幼苗生长，10d后剪掉根系扦插移 栽于蛭石中，能促使非转基因植株衰弱或死亡 ，有效地加速筛选。应用该筛选体系对花粉管通道法获得的抗虫转基 因黄瓜 Tn种子进行初步筛选 ，获得 Km抗性植株 ，抗性植株筛选率为 1．6％，其 中8．9％经 PCR分子检测为阳性植株 ， 初步证实 EQKAM抗虫基因已整合到黄瓜基 因组 中 关键词 ：黄瓜 ；花粉管通道法 ；卡那霉素 中图分类号 ：Sb42．203．6 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—7091(2008)06—0054—04 InductionofInsect-resistantGeneintoCucumberbyPollenTubePathway andSelectionofKanamycin Resistance WEIAi—min，ZHANG Wen—zhu，DU Sheng—li，HAN Yi—ke，ZHANG Gui—hua，LIU Nan (TianjinKernelCucumberResearchInstitute，Tianjin 300192，China) Abstract：EffectsofKanamycinofdifferentconcentrationoncucumberseed germinationandseedlinggrowthwere studied．Screeningmethodforkanamycin resistantseedlingWaSestablished．Seedsweresowedfirstin 1／2MS medium containingKm 200mg／L，seedlinggrowthcouldbeeffectivelyinhibited．After10d，rootwascutandthentransplantedthe seedlingintoKm freevemr iculitecouldenhanceseedlingdeclininganddying，andthereforeenhancedscreeningofresis— tantplants．Toseedsfrom pollentubepathwaytransfomr ationwerescreenedbythismethod，1．6％ ofseedlingsweretested asresistant，amongthem8．9％weretestedasPERnegative．ItprimarilycertifiedthatEQKAM genewascombinedinto Cucumb ergenegroup． Keywords：Cucumb er(CucumissativusL．)；Pollentubepathway；Kanamycin 在黄瓜 (CucumissativusL)生产过程中极易受到 制剂基因，是一种广谱抗虫基 因，其 中 epuistatin和 蚜虫、茶黄螨、白粉虱 、蓟马等虫害的侵袭 ，而使产量 MTI2一chy8已证 明对桃蚜、棉蚜 、蚕豆蚜有显著抑制 和质量明显下降，化学农药的施用又会造成农药残 作用[2，。 留、环境污染、诱导害虫产生抗药性、引起 次要害虫 卡那霉素(Km)是常用的转基因筛选标记，但有 发生等危害。利用基因工程手段导入外源基因，创 关黄瓜对 Km的抗性反应 目前还没有系统的研究报 造抗虫黄瓜新种质 ，解决抗虫资源缺乏的矛盾 ，最终