新生小鼠视网膜组织中MCP-1的表达变化及意义.pdfVIP

山东医药2011年第 5l卷第26期 新生小 鼠视网膜组织中MCP一1的表达 变化及意义 董 宁。褚利群 ’。肖 林，王冰松 。徐 冰 (北京世纪坛医院，北京 100038) 摘要 ：目的 观察新生小鼠视网膜发育过程中单核细胞趋化蛋白一1(MCP一1)的表达，探讨其在视网膜血管发育 过程中的作用。方法 选择C57BL／6J幼鼠(分别为3…5712、14、21日龄各 10只)60只。将所有小 鼠按 13龄处 死，立即摘除眼球 ，取视网膜组织 ，分别采用 RT．PCR、Westernblot和免疫组化染色检测 MCP-1mRNA和蛋白。结 果 MCP．1mRNA和蛋白在3日龄小鼠视网膜组织中即有表达，12日龄时呈现一过性高表达，之后迅速下降，21 日龄时表达基本呈基线水平。结论 小鼠的视网膜发育过程始终伴随MCP-1的表达，其在 12日龄时(视网膜血管 发育关键期)的高表达可能与视网膜血管的发育和迅速成熟有关。 关键词 ：单核细胞趋化蛋 白一1；视网膜 ；发育 中图分类号：R774．1 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2011)26-0037-02 单核细胞趋化蛋白一l(MCP．1)是趋化因子家族 MCP—l上 游 引物：5．CTGGACCCAACTGCAACT— 中的主要成员之一，在肿瘤、炎症、糖尿病视网膜病 GCTF-3，MCP一1下游 引物 ：5一ACTGGCCTTCG— 变等新生血管性疾病中，MCP一1起着重要的作用。 GqTFccTrATC一3，扩增片段 544bp；31一actin上游 它与血管内皮生长因子 (VEGF)共同参与新生血管 弓I物 ：5 一TCATGAAGTGTGACGTTGACATCCGT一 的形成…，VEGF可通过激活核因子 (NF)一KB、活化 3，8．actin下游弓f物：5一TcCAGAAGCATITGCGGT— 蛋 白(AP)一1而诱导血管内皮细胞表达MCP一1_2]，而 GCACGATG．3，扩增片段316bp。合成cDNA，PCR MCP一1可以作用于血管内皮细胞膜上的高亲和受体 扩增过程：55℃、30min，预变性94℃、2min，变性 CCR2，与G蛋 白结合 ，趋化内皮细胞定向运动；同时 94℃、15S，退火57℃、30S，延伸 72oC、1min，后延 MCP一1可趋化肿瘤相关巨噬细胞 (TAM)进入组织， 伸72℃、10min，共 35个循环。PCR产物经 1．5％ 分泌VEGF等，间接刺激肿瘤新生血管生成。而许 琼脂糖凝胶 电泳后，用图像分析仪进行图像分析。 多致盲性视网膜疾病都与新生血管的产生有关。 所得结果与B．actin的比值为 MCP一1mRNA相对表 2010年6～7月，我们观察了新生小鼠视网膜发育 达量。每样品实验重复 3次，取均值。②Western 过程中MCP一1的表达 ，探讨其在血管形成过程中的 blot检测：取部分视网膜组织，提取总蛋 白，参照文 作用。现报告如下。 献 J，将定影后的x线胶片用 ⅣcKy—F30B图像摄 1 材料与方法 录输入仪扫描，KONTRONIBAS2．0全 自动图像分析 1．1 实验动物 C57BL／6J幼鼠(3、5、7、l2、14、21 系统 (德国Koutron公司)进行半定量分析。所得结 日龄小鼠各 1O只)60只，雌雄不限，均为无特定病 果与内参照GAPDH的比值为MCP一1蛋白相对表达 原体级(SPF级)，由中国人民解放军军事医学科学 量。每样品实验重复3次，取其均值。③免疫组化 院实验动物中心提供。 sP染色：取部分视网膜组织，10％甲醛固定，石蜡包 1．2 实验方法 将所有小 鼠按 日龄(3、5、7、12、14、 埋，5～7 m厚切片。采用免疫组化 sP法染色。按 21日)分别处死。立即摘除眼球，冰上分离视网膜， 试剂盒 (福州迈新生物技术开发公司)说明书操作， 分别采用RT—PCR和Westernblot法、免疫组化染色 一 抗为单克