二十一世纪的医学诊疗技术——基因诊断与治疗.PPTVIP

清华版教材《医学生物化学与分子生物学》课件 ～ 21 ～ 二十一世纪医学诊疗技术——基因诊断与治疗 人类疾病 人类疾病分为遗传性疾病和获得性疾病。 遗传性疾病主要是自身基因结构或表达异常所致。 获得性疾病主要是由环境因素引起。 疾病是环境因素与人体相互作用而形成的一种特殊生命过程，包括“发生、发展、转归”三个阶段。 疾病是环境因素与遗传因素相互作用的结果，即使完全由环境因素所导致的疾病（例如烧伤、烫伤等），其病程长短、修复难易也与个体的遗传类型有关。 任何疾病都与基因有直接或间接的关系，都是特定基因型在一定条件下的表现。 疾病的诊断治疗 传统医学是被动的，主要是从环境因素去寻找病因，根据疾病发生后的症状进行诊治。 现代医学是主动的，注重在疾病发生前进行预测，并采取适当措施预防疾病的发生。 基因诊断（gene diagnosis）和基因治疗（gene therapy）技术不仅可以从基因水平上诊断和治疗疾病，而且可以开展个性化的医疗服务。 21.1 基因诊断 中医“望闻问切”、西医“视触叩听”，还有实验室检查、器械检查等。 传统诊断方法以疾病表型为依据，表型改变不是特异的，在疾病发生一定时间才有表现，不能及时作出明确诊断。 “早期诊断、早期治疗” 是临床医生的努力方向。 基因诊断从源头上去查找问题，从基因水平去阐明疾病的病因和发病过程。 21.1.1 基因诊断概述 基因诊断是采用分子生物学技术来分析受检者的某一特定基因的结构（DNA水平）或功能（RNA水平）是否正常，以此来对相应的疾病进行诊断。 基因诊断项目一般包括基因序列分析、基因突变检测、基因剂量和拷贝数测定、基因表达产物分析、外源基因检测等。 基因诊断技术分为定性分析和定量分析。定性分析一般用于基因分型、基因突变检测、外源感染性病原体基因检测等；定量分析一般用于测定基因或染色体拷贝数以及基因的表达产物，不同项目的基因诊断应该选择适宜的技术。 分子诊断 采用分子生物学技术对DNA序列及其表达产物（RNA或蛋白质）进行定性、定量分析，称为分子诊断（molecular diagnosis）。 针对DNA的分子诊断称为DNA诊断（DNA diagnosis）或基因诊断。 对表达产物mRNA质和量的变化进行分析称为RNA诊断（RNA diagnosis）。 对蛋白质的质和量的变化进行分析称为蛋白质诊断（protein diagnosis）。 一般未将基因诊断和分子诊断严格区分，通常所说的基因诊断已经包括RNA和蛋白质诊断的内容。 从技术角度讲，DNA诊断相对较易，蛋白质诊断相对较难。 目前开展的分子诊断主要是针对DNA的，很少将蛋白质作为分析对象。 一般涉及到基因功能分析时，才需要进行RNA诊断。 21.1.1.1 形成和发展 20世纪70年代初，限制性内切酶的发现和DNA分子杂交技术的建立为基因诊断奠定了基础。 1978年，美籍华裔科学家简悦威（Y.M. Kan）根据胎儿羊水细胞DNA作出镰形红细胞贫血症的产前诊断，开创了基因诊断技术应用于临床的时代。 早期主要针对遗传病，特别是单基因病，具有高度的特异性 。前提是疾病表型与基因型关系已经明确。 现在广泛用于各种疾病的诊断，包括肿瘤、病毒感染性疾病、高脂蛋白血症、寄生虫病、传染病病原体的诊断等。 21.1.1.2 特点和临床意义 针对性强：以基因为探查对象，是基因水平的病因诊断。 特异性高：选用特定基因序列作为探针进行分子杂交，能准确探知被检样品中是否存在相应序列。 灵敏度高：PCR技术解决了样品需求量大的难题，极大地提高了灵敏度。 适用面广：检测目标可以是任何一段DNA序列、一个特定基因或一组基因，内源或外源基因，开放或关闭的基因。检测那些具有组织和分化表达特异性的基因。 临床意义 诊断疑难疾病：弄清致病基因类型，了解发病过程和机制，对疾病分类分型，提供最佳治疗方案。 预防重大疾病：预测易感因素，提供预防对策。 预测疾病发生：检测感染性流行病病原体，探知不同病原体之间的同源性，为流调提供可靠资料。 血源及各种生物制剂的安全：灵敏地检出携带病毒的细胞。 改善器官移植：分析基因型，有效完成组织配型。 提高人口质量：广泛开展产前基因诊断，杜绝患儿出生，降低发病率。 21.1.1.3 原理和技术流程 基本原理：检测相关基因结构及表达功能，特别是RNA产物是否正常。采用特异DNA探针与靶基因分子杂交，可直接检测上述变化。 技术流程：样品核酸抽提→靶序列扩增→分子杂交→信号检测。 取样：依诊断项目不同而异。利用PCR技术只需采集微量样品就可使其中的DNA大量扩增。 分析：核酸分子探针技术是确认DNA中是否存在某一特定序列的基本方法。PCR技术也可