细胞色素P450IIE1mRNA表达水平在酒精性肝病发病机制中的作用研究.pdfVIP

第 5卷 第 12期 亚 太 传 统 医 药 Vo1．5No．12 2009年 l2月 Asia—PacificTraditionalMedicine Dec．20o9 细胞色素P450¨E1mRNA表达水平在酒精性肝病 发病机制中的作用研究 刘 颖 ，孟祥伟 ，王寅东 ，郑洪民 (1．黑龙江省医院，黑龙江 哈尔滨 150000；2．吉林大学附属第一医院，吉林 长春 130033) 摘 要 ：目的：探讨细胞色素P450IIE1(CYPIIE1)mRNA表达水平和 东北地区酒精性肝病发病机制之间的关系。 方法 ：分别收集353名酒精性肝病患者、360名健康对照者的外周血2mL，采 用实时聚合酶链反应 (RT-PCR)用 于检测CYPIIE1在酒精性肝病 患者及健康对照人群 中mRNA的表达水平。结果：在酒精性肝病患者 中CYPIIE1 mRNA水平 (10．21％)明显高于对照组 (2．05％)(PO．001)。结论 ：东北地 区酒精性肝病 患者与健康对照组相 比 CYPIIE1mRNA表达水平明显升高，该蛋白活性增加 ，致使体 内氧 自由基增加及线粒体损伤加剧 ，从而使肝脏 发生炎症、坏死乃至纤维化，导致了酒精性肝病的发生和发展。 关键词：酒精性肝病 ；P450IIEI；mRNA表达水平 中图分类号 ：R575．1 文献标识码：A 文章编号：1673—2197(2009)12—0003—02 细胞色素P450IIE1(CYPIIE1)，是微粒体乙醇氧化酶l1]， 1．2 方 法 它存在于肝细胞内，是人体重要的I相物质代谢酶。参与药 1．2．1 全 血 总 RNA的抽 提 物、致癌物和毒物 的活化过程 ，这些物质经过 CYPIIE1代谢 (1)将所试验的血样按顺序放置 ，室温下解冻 ，加入红 活化可导致某些疾病如酒精性肝病的发生l2]。 细胞裂解液。 CYPIIE1分子量为56．9KDa，定位于 10q24．3一qter，大 (2)依次往各组每个试管中加入 1．5mLTrizol(预冷)。 小为 114Kb，是 由9个外显子和 8个 内含子组 成 ，编码 由 (3)依次将溶液转至2．OraLEppendorf管中。 (4)各管 中加入氯仿 200~／L，激烈振荡 30s。 493个氨基酸组成的蛋 白质 ]。在 CYPIIE1较多的限制性 片段长度 多态性 中，其 中 5端 的PstI和 Rsal多态性使 (5)4℃，1500Or／min，离心 8min。 (6)小心吸出水层 ，再加入 2倍体积 的异丙醇 (约 CYPIIE1分为 3种基 因型 ：A(C1纯合子)、B(C1／C2杂合 5001xL)，混匀 ，置于一20％冰箱 ，45min。 子 )、C(C2纯台子 )，C1为野生型基 因，C2为突变型基 因。 (7)4~C，12000r／min，离心 10min，弃上清液留沉淀。 C2频率存在着人群差异 、种族差异。等位基 因C2可以增 (8)用 500~L，75％乙醇洗涤 沉淀 ，4℃，10O00r／min， 强该酶的转录活性从而提高酶 的活性 ]。 离心 5min，弃上清液 留沉淀。 酗酒在 中国正成为一个 日益严重的问题 。本研究正是 (9)打开管盖 ，干式恒温器 6