特异性酶反应在食源性致病菌检测中的应用.pdfVIP

%.- 中国卫生检验杂志+**. 年% 月 第. 卷 第% 期! B\35(M( ^:4I52) :6 ?(2)Y\ Q2W:I2Y:IL ’(8\5:):OL ，@2I +**. ；R:) .! D: % 【继续教育】 特异性酶反应在食源性致病菌检测中的应用 + 卢勉飞 ，吴清平 ，刘云林 ，蔡芷荷 ，符高敏 （; 广东环凯微生物科技有限公司，广州! .**$* ；+; 广东省微生物研究所，广州! .**$* ） ［摘要］! 在食源性致病菌的快速检测中近来发展了一种新的技术，其原理是使用适当的荧光或显色底物，在细菌特异性 酶作用下，产生荧光或显示一定颜色。这种用紫外灯观察细菌产生的荧光或直接观察菌落颜色的快速分析法，可以把检 测、计数和鉴定一次完成。应用荧光或显色酶底物来检测微生物专一性和特异性的方法，推动了食源性致病菌的鉴定以 及早期筛选培养基一系列技术的发展。这些基于酶的试验方法具有简便、快速、准确和检出率高的优点。 ［关键词］ ! 荧光；显色；特异性酶；底物；食源性致病菌 ［中图分类号］ ! ’+*; %! ! ! ! ［文献标识码］! =! ! ! ! ［文章编号］! **- ,/,.（+**. ）*% *%.- *% ! ! 随着人们居住和卫生条件的不断改善，以及抗生素的滥 （2)1:5 ），D 甲基吲哚基（HI((5 ）和. 碘代 % 吲哚基 用，人类对病原菌的抵抗能力在不断下降，尤其是近年来在 （J:K: ）化合物。显色化合物具有水溶性、热稳定性、特殊性和 水、食品以及化妆品方面存在的病原菌所引起的各种感染性 不扩散性（吲哚衍生物）。荧光底物比较昂贵，而且有些化合 疾病一直呈上升的趋势。因此，对这些致病菌的监测和检验 物不稳定和不溶于水。显色底物很少有像荧光底物那样灵敏 就显得越来越重要。传统的微生物检验法是目前常用的检测 的，但它们比较便宜。 方法，但检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多等缺点已远不 能满足现代检验和监测的需要。 # 特异性酶 近年来通过特异性显色反应来实现细菌检测和鉴别的新 +; ! 糖苷酶（H)L8:M3K2M(M ） 技术得到较快发展。其原理是利用通常情况下人工合成的无 +; ; ! 葡萄糖醛酸酶（ N O)484I:53K2M( ，HAN ）! 大肠 ! ! 色底物，在活体细菌细胞中存在的特异性酶作用下游离出产 埃希菌（!#$%’#$’( #)*’ ），绝大多数具有 葡萄糖醛酸酶 ! 色基团并产生荧光或显示一定颜色，用紫外灯观察菌落产生 （HAN ），HAN 可催化N 吡喃葡萄糖酸水解成相应的甙配基 的荧光或直接观察菌落颜色即可对菌株做出鉴定。有关这方 和N 葡萄醛酸。大肠埃希菌中一些致病菌如!; #)*’ C.$ P ?$ 面的文献已有不少，在这些文献中重点提及的是用此法检测 ［］ （0?0B ）却不具此酶，其他埃希菌属也不具有此酶 。 肠道菌群。这种敏感的方法提高了检测的速度和准确性，优 HAN 的活性可用不同的荧光或显色底物来检测，如对位 于初期分离的培养基，可以省略为了鉴别而必须先分离出纯