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第 29卷第 2期 健 康 研 究 V01．29NO．2 2009年 4月 HealthResearch Apr．2009 获取基因全长 eDNA策略及应用 邵 珏，邵玉锁 ，曹明富 (杭州师范大学生命 与环境科学学院 ，杭州 310036) 摘要：全长 cDNA是研究基 因功能 的关键 ，获得全长 cDNA也是基 因组研究 的重要 内容之一 ，本文概述 了近年来 国 内外获取未知基 因eDNA全长的理论及其应用 。 关键词 ：全长 eDNA；mRNA；PCR；进展 中图分类号 ：Q73 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—4894(2009)02—0140—03 模式植物结构基 因组 的相继 阐 明，多种植物 了拟南芥雄性不育基因BnMs2；Pan等 分离到 了 高密度分子标记连锁 图谱 的构建、大片段 DNA克 一 个新 的水稻细胞色素 P450基 因 CYP81A6，这个 隆系统 的建立 ，序 列测定技术和基 因遗传转化技 基因对2种除草剂具有抗性 ；Paul等 在拟南芥 中 术 的发展 ，使得更多未知基因的克 隆成为可能，同 分离到了与拟南芥根尖铝元素运输和敖合相关的基 时也为后基 因组时代提供 了更 富有挑 战性 的任 因ALS1—1。 务 。不论功能基因组学 多么深 奥 ，其认识基 因功 能 的基本前提是获取可能有相关功能的基 因之全 2 转座子或 TD·NA标签法 (transposonorT-DNA 长编码序列。其 中，全长 cDNA序列 的获取是正确 taggingmethod) 地注释基 因组序列 、进行基 因的功 能及产物分析 此法的基本程序为 ：首先进行突变体的诱变和 的必要前提 。本文就获取基 因全长 cDNA策略及 鉴定工作 ，然后 以转座子或 T-DNA作为标签 DNA 应用进行综述 。 制成探针或引物 ，筛选突变体基 因组文库 ，用反义 PCR(IPCR)技术分离出标签 DNA两侧 目的基 因部 1 图位克隆技术 (map-basecloningorpositional 分序列，再依据序列设计探针或引物筛选野生型基 cloning) 因组文库 ，即可分离出完整的基因，最后用基因互补 其基本工作思路为：首先将 目的基 因精确定位 测验检测其功能。现在又发展了一种转座子捕捉 在分子标记连锁图上 ，利用与 目的基 因紧密连锁 的 (transposontraps)的手段来捕捉那些无表型突变的 标记筛选大片段 DNA文库 (如 YAC、BAC、TAC、 基因，包括有增强子捕捉和基因捕捉两种类型。在 PAC或 cosmid文库)，并构建含 目的基因区域的精 植物中利用 的转座子系统有 Ae／Ds、Mutator等，其 细物理 图谱 ，利用该物理 图谱采用染色体步行 中以Ac／Ds双 因子系统利用最多。 目前应用该方 (chromosomewalking)的方法逐步逼近 目的基 因。 法 已克隆到的植物抗病基 因有玉米抗 圆斑病基 因 图位克隆法首先被应用于模式植物拟南芥 (Arobi- Hml，Hm2，番茄抗 叶霉病基因Cf-2，Cf-4，Cf-5，Cf-9 dopsisthaliana)。应用该方法 ，傅廷栋等 ¨成功分离 及 Cf．ECP2等 。黄海宁等 应用转座子标签法 收稿 日期：2008—12—19 作者简介：邵 珏 (1983一)，女 ，浙江杭州人 ，硕士研究生 ，专业 ：遗传学 。 通信作者：曹明富(1955一)，男 ，浙江海 宁人