家畜卵母细胞冷冻保存的研究进展.pdfVIP

河北畜牧兽医 专论综述 李雪松，桑润滋 （河北农业大学动物科技学院，河北保定’(!))!） 自 首次成功的报道冷冻 解 母细胞进行冷冻保存，解冻后形态正常率分别为 #$%%’($)*+,--. / HGFD’ HJFE’ H!FH’ 冻的小鼠卵母细胞活仔以来，国内外诸多学者对家 ， 和 ，前二者的卵母细胞成熟率 畜及人的卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前 已 分别为 和 。由于该法在冷冻过程中会 0 ,F-’ 7EFD’ 有小鼠、家兔 、牛等动物以及人的卵母细胞冷冻 形成冰晶，容易损伤细胞，而且操作复杂，耗时长， 成功并得到了后代。在国内山羊 、绵羊、猪等家 需要昂贵的降温设备，这均是其在生产中推广受 0 0 畜的卵母细胞冷冻保存也已有报道。随着胚胎工 限的一些影响因素。于永生等+7EE7.采用常规冷冻 程技术的不断发展卵母细胞的冷冻保存越来越受 法冷冻牛的卵泡卵母细胞 经体外受精获得了 0 0 到重视0这将推动卵母细胞的冷冻保存取得更大进 F’的受精率和!FD’的卵裂率。 展。 ## 玻璃化冷冻法 ! 抗冻保护剂 !!!!!! 自9) 等（,H!）用玻璃化法成功的保存了小 在卵母细胞和胚胎的冷冻保存时，需使用抗冻 鼠的胚胎以来，经过国内外诸多学者的改进，冷冻 保护剂，它可以改变细胞在冷冻过程中的物理化 方法已基本成熟。玻璃化冷冻法因其耗时短，而且 学环境，减轻或避免冷冻、解冻过程中的冷冻损 无需昂贵的程序降温仪，从而受到众多人士的青 伤。抗冻保护剂主要为一些易溶于水的低分子量 睐。该法一般采用高浓度的玻璃化溶液作为冷冻 有机物及个别高分子有机物。常用的抗冻保护剂 保护液，它由多种抗冻保护剂按一定比例混合而 分为渗透性抗冻保护剂和非渗透性抗冻保护剂两 成，因其浓度高，低温时会变得黏稠，不形成冰晶， 大类。 而是形成无规则的玻璃样固体，这就有效的减少 !! 渗透性抗冻保护剂 了对细胞的冰晶损伤。但卵母细胞暴露在玻璃化 渗透性抗冻保护剂又称为细胞内液抗冻保护 溶液中的时间应严格控制在一定范围之内，否则 剂，它们易于通过细胞膜。其中包括甘油、二甲基 高浓度的抗冻保护剂会对细胞产生毒害作用。 亚砜（ ）、乙二醇（ ）、， 丙二醇（ ）、 细管法 1234 56 7/ 894: ##! 乙烯醇、乙烯胺、乙酰胺等。 此法以EF7!* 细管作为承载卵母细胞的工 非渗透性抗冻保护剂 具。李辉等（ ）以甘油和 作为抗冻保护剂， !# 7EE7 56 非渗透性抗冻保护剂又称为细胞外液抗冻保 将绵羊的卵母细胞经两次平衡后，移入玻璃化溶 护剂，它们不渗入细胞内部。其中包括蔗糖、聚蔗 液EF!*%’ 内投入液氮保存，解冻后形态正