芯片自由流电泳(μ-FFE)系统的建立及表征.pdfVIP

芯片单元技术 芯片自由流电泳(旷FFE)系统的建立及表征 张玉秀，方芳，杨萍萍，吴志勇。 V 自由流电泳(freeflow 在扁平分离通道中的自由流场中，组分在与流动方向正交的电场的作用下发生偏离从而实现 不同组分之间的同时分离，可克服批次进样对样品容量的限制。同普通毛细管电泳一样，FFE 有多种操作模式，例如自由区带电泳，等电聚焦，等速电泳等，目前已经有商品化仪器，可 用于分子离子及生物大分子的制备分离，还被用于细胞及亚细胞的分离[1]。作为一种特殊 的制备分离方法最近在复杂蛋白质组样品分组分离中得到关注[2]。FFE的微型化有利于稳 定流场的建立，同时降低焦耳热的产生，从而可提高电场强度，分离效率得到显著提高[3]。 在微量样品的快速处理中有很大的应用潜力。本文利用微流控芯片方法设计加工了三种自由 流电泳芯片，成功的实现了探阵分子的分离。 实验部分 用玻璃基材光刻的方法制备了两种玻璃FFE芯片，采用电极通道的方法将电泳电极引入 芯片中[4]。芯片A采用定位脊的方法将阴阳极定位在分离通道的两侧，分离通道深60um， 总宽500um，分离通道和电极直接联通。芯片B采用刻蚀形成的删栏结构将电极通道和分离 通道隔离，分离腔宽lOmm，厚15帅，电极通道在盖片上刻蚀形成，深85啪，通过电极通道 将直径50um的铂丝电极插入电极通道。芯片C由ITO玻璃制备，ITO玻璃上的导电层直接 用作电泳电极，用光刻的方法刻蚀导电层得到平面电极结构，用双面胶与另一载玻片贴合即 形成FFE芯片，电极与分离通道直接联通。 电极液、支持电解质溶液和样品液用注射泵注入芯片中。探阵样品混合溶液为 5×10—3mol／L的荧光素钠和罗丹明6G。对于芯片A在倒置荧光显微镜下CCD成像表征。芯片 B和芯片C的分离效果在自制蓝色LED阵列光源激发荧光的方法观测加电压前后样品流的分 NazC03一NaHCOs 离情况，通过滤光片和数码相机记录分离结果。所用的缓冲液是0．01mol／L 缓冲体系(pH8．4)，所有溶液均超声去气处理。 结果与讨论 图l是用芯片A得到的在电极之间施加72V／cm电场得到的pH分布情况，由荧光素的 荧光强度变化指示。直接利用电解作用形成的pH梯度流场可能用于等电聚焦分离。图2ab 是用芯片B在自由区带电泳模式下分离探阵分子的结果。图中流动方向自上而下，电场方向 从左到右。在电场的作用下两个探阵分子得到明显分离，荧光素在支持电解质中带负电荷， 明显偏向正极(左)，而罗丹明6G带正电荷，因此流动方向在阴极一侧。图2cd是用芯片C 分离的结果，由图可见，在该芯片上两种荧光探阵分子同样得到了有效的分离。 此外我们还对玻璃芯片的电渗行为进行了表征，用光导向定位聚合的方法在芯片上成 功制备了离子导通的聚合物隔离带，为分离影响因素研究及芯片的改进传造了条件。不同芯 片FFE分离模式的研究正在进行中。预计基于多分离模式和多维芯片FFE系统在微量样品 高利用率连续预的分离方法在复杂混合物分组分离，特别是复杂蛋白质混合物的快速分离处 理中将得到应用。 通讯联系人；吴志勇 96 徽疏撺芯片实验室进艘 O ● j秽≯甲 + * ， j／ ＼ ^]／二：：‰。 ＼ ∞u岳8eo芑口∞笪##5z {J。 ～1“¨” ．~ ^ + j 0 50 100 160 200 260 ]■一- PH●‘●…，●hiHrOd●J mJ4*№目擞**＆m*摊度＆Ⅱ。甚H^∞屯桠之间的电压l pHm2《№镕缓冲镕№* b