法尼基转移酶抑制剂manumycin诱导HepG2细胞凋亡地研究.pdfVIP

法尼基转移酶抑制剂manumycin 诱导HepG2细胞凋亡的研究。 周军民1潘启超10橱小平1刘宗潮1廖端芳2特立捂1粱永钷1 (1．中山医科大学砷●防治中心肿瘤研究所广，ll51呻60；2南华太学药均药理研究所夤甩42l∞1 rnanmnydn及相关化合物是从链丝菌培养液中发现的，理化性质和光谱数据表明分 子中含有共轭多烯链、酰胺基团和环戊醇酮等手霉素族抗生紊共有的结构特征。它除了 抗菌活性外，还具有多方面的药理活性：抗肿瘤作用、抗真菌、抗食叶害虫。最近还发现 nmurnycin有抑制法尼基蛋白转移酶的作用，其酰胺侧链与法尼基焦膦酸酯(Famesyl． 啪∞ferase，FTase)，且特异性强【1 J。HmnuHlydn毒性低，目前正在进行临床前研究，这种 PFT的抑制剂很有可能成为治疗肿瘤的新药物【2 J。本研究试图探讨manmlydn能否诱 导肝癌细胞发生凋亡及其探讨m姐urnydn诱导细胞凋亡的机制，为其临床应用提供实验 依据。 l材料与方法 1．1细胞系和主要试剂 人肝癌细胞株HepG2由我室传代培养；噻唑蓝(MTT)、碘化丙啶(PI)染色液、琼脂 试剂盒为Gib∞公司产品；bcL2、p53、ba)【抗体、}Ⅱ即联连的抗兔与抗鼠的二抗均为Santa cnlz公司产品；聚丙烯酰胺、双聚丙烯酰胺、疆)S、nis为北京中山生物技术公司产品。 1．2方法 1．2．1Mrr试验取对数生长期的Hf牺2细胞，制成5×104个／hd单细胞悬液，接 种于96孔板，每孔200 h pl(郎1×104个细胞吼)，37℃5％O。2培养箱培养，培养24 后，加入不同浓度nm∞”iTl10础，设O．2％功匹D对照组，继续培养48h，实验终止前4 h每孔加人浓度为5 10 mg／甜的MTTp1，畏4试前弃去培养液加瑚d90200正，待结晶溶 解后在酶联检测仪上于570一波长测每孔的oD值。按下列公式计算抑制率：抑制率= (1一实验组平均OD值／对照组平均OD值)×100％，用POMs软件计算细胞生长抑制 达50％的mallurnycm浓度，以IC50表示。 @基金项目：国家教委博士点基金项目(9H9)，湖南省科委重点课题(缡号：9BssYl001)。 @通讯作者．1d：晰_20F“：86-20 ·274· 1．2．2Mm畔血诱导肝癌细胞株}Iq，G2凋亡 1．DNA提取和电泳：取对数生长期Hf!pG2细胞制成2×los个／Ⅱd单细胞悬液，5“ 种植于50删培养瓶中，分别设溶剂对照组和终浓度为20衄10l／L的mnm”jn处理组， 处理组分别于12。24和48 h收集细胞，用PBS洗一次，按DNA∞I试剂盒上的方法提取 DNA【”，取制备的DNA样品10pl在1．8％的璇a自糖凝胶上电泳。紫外灯下观察。 2．流式细胞仪检测：分别取对照组和药物处理组HepG2细胞约1×106个，经P丑S 离心冲洗2次，以70％乙醇固定过夜，细胞由碘化丙锭(PI)染色，4℃避光30rnin，流式细 胞仪分析细胞周期和DNA的含量。 h的HepG2细胞， 3．DAPI染色：分别取对照组和经20肛d／LⅡmurnydn处理48 涂片，荧光显微镜观察细胞的形态变化。 1．2．3wdtm b10t法检测取对数生长期的HepG2细胞，稀释成1×106埘，接种于 50 r11I培养瓶中培养，每瓶10 000 r／ndn)10Tnin，加人 h后，收集细胞，PBs洗涤2次，加人细胞裂解液100pl，离心(14 7．4，1rnnlol