链球菌蛋白诱导胶质母细胞瘤BT325细胞周期阻滞及凋亡的机制研究.pdfVIP

检验医学２０１４年４月第２９卷第４期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｐｒｉｌ２０１４，Ｖｏｌ２９．Ｎｏ４． ·３６３· 文章编号：１６７３８６４０（２０１４）０４０３６３０６　　中图分类号：Ｒ４４６．６２　　文献标志码：Ａ　　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３８６４０．２０１４．０４．０１５ 链球菌蛋白诱导胶质母细胞瘤ＢＴ３２５细胞周期 阻滞及凋亡的机制研究 １ ２ ２ ２ ２ ２ ３ 王　艳 ，　张力平 ，　陈　辉 ，　曹　宁 ，　朱俊萍 ，　平国玲 ，　李卫红 （１．北京积水潭医院检验科，北京 １０００３５；２．首都医科大学病原生物学系，北京 １０００６９； ３．首都医科大学细胞生物学系，北京 １０００６９） 　　摘要：目的　探讨链球菌蛋白诱导人脑多形性胶质母细胞瘤ＢＴ３２５细胞周期阻滞及凋亡的相关作用机制。 方法　体外培养人脑多形性胶质母细胞瘤ＢＴ３２５细胞，噻唑蓝（ＭＴＴ）法检测细胞增殖活性，倒置显微镜下观察细 胞形态变化，原位染色后荧光显微镜下观察凋亡细胞，流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡率及线粒体膜电位 （ＭＭＰ），蛋白质印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果　链球菌蛋白（１０～１００ｍｇ／Ｌ）可显著 抑制细胞增殖，使细胞周期阻滞于Ｇ２／Ｍ期，呈时间和剂量依赖性；链球菌蛋白作用细胞２４ｈ后，ＭＭＰ显著下降 （Ｐ＜０．０１），凋亡细胞逐渐增多，４８ｈ时各实验组凋亡率明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；链球菌蛋白（５０ｍｇ／Ｌ）呈时间 依赖性增强细胞Ｐ５３蛋白表达，抑制Ｂ淋巴细胞瘤２（Ｂｃｌ２）蛋白表达，促使细胞色素Ｃ（ＣｙｔＣ）从线粒体进入胞质， 从而激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶３前体（Ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ３）。结论　链球菌蛋白可显著抑制人脑多形性胶质母细胞 瘤ＢＴ３２５细胞增殖，影响细胞周期分布，通过线粒体途径诱导细胞发生凋亡，由此发挥其抗肿瘤活性作用。 关键词：链球菌；人脑多形性胶质母细胞瘤ＢＴ３２５细胞；细胞周期；细胞凋亡；线粒体膜电位 　　Ｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌｐｒｏｔｅｉｎｉｎｄｕｃｉｎｇｃｙｃｌｅａｒｒｅｓｔａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ １ ２ ２ ２ ２ ２ ３ ＢＴ３２５ｃｅｌｌ　ＷＡＮＧＹａｎ，ＺＨＡＮＧＬｉｐｉｎｇ，ＣＨＥＮＨｕｉ，ＣＡＯＮｉｎｇ，ＺＨＵＪｕｎｐｉｎｇ，ＰＩＮＧＧｕｏｌｉｎｇ，ＬＩＷｅｉｈｏｎｇ． 　（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＪｉｓｈｕｉｔａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００３５，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆ ＰａｔｈｏｇｅｎｉｃＢｉｏｌｏｇｙ，ＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００６９，Ｃｈｉｎａ；３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，ＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００６９，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌｐｒｏｔｅｉｎｉｎｄｕｃｉｎｇｃｙｃｌｅａｒｒｅｓｔａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎ ｈｕｍａｎｃｅｒｅｂｒａｌｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａＢＴ３２５ｃｅｌｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＨｕｍａｎｃｅｒｅｂｒａｌｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａＢＴ３２５ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏ，ａｎｄ ｍｅｔｈｌｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｄｉｅｎｙｌｍａｎｇａｎｅｓｅｔｒｉｃａｒｂｏｎｙｌ（ＭＴＴ）ａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＢＴ３２５ｃｅｌｌｓ． Ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌ