促红细胞生成素衍生肽抑制大鼠心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤的作用研究.pdfVIP

280 巾目循环杂志2015年 3月第 3()卷第 3期 (总第 201期 )ChinseCircula!ionJournal，Marth·，2015，Vo1．30No．3(SerialNo．201) 促红细胞生成素衍生肽抑制大鼠心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤的 作用研究 王琛，司瑞，张明明，余文军，郝启萌，张荣庆，王海昌 摘要 H的：探讨促红细胞生成素衍生肽 (HBSP)抑制大鼠心肌微血管内皮细胞 (CMECs)缺 ／再灌滓损伤的作用及其 饥制 ， 厅法：分离培养大鼠CMECs，建寺缺血 ／再灌沣损伤模型，随机分为对照组 、模拟缺血 ／再灌注组 (SI／R组 )、 SIR／+重组人促红细胞生成素组 (SI／R+rhEP()组 )、SI／R+HBSP组 ；HBSP分别选择 2．5ngm／l、25ngm／l、50ng／ m1、100ng／ml四个浓度，通过嚷唑蓝(MTT)比色实验检测 CMECs增殖能力以确定药物作用的最适浓度。而后采用 胞划痕实验检洲细胞迁移能力，末端脱氧核许酸转移酶介导的dUTP缺 口末端标记测定 (TUNEL)法榆测细胞凋 牢来进一步验证其保护作用。研究保护机制的实验分组为：对照组 、SI／R组 、SI／R+HBSP(HBSP最适浓度为 25ng／nd)组 、SI／R+HBSP+磷脂酰肌醇一3激酶 (PI3K)抑制剂 (LY294002)组、SI／R+HBSP+雷帕霉素组 ，采用蛋门 免疫印迹(Westernblot)法检测蛋 白激酶 B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋fL1(mTOR)、核糖体 s6蛋 白激酶 (p70S6K) 等蛋广1的表达及 磷酸化水平。 结果： SI／R组比，S1／R+rhEPO组和SIR／+HBSP组CMECs增殖能力明显 I二升(P0．05)，凋亡率显著下降(P0．01)， 辽移能力增强。 f『J抑制剂LY294002及雷帕霉素处理后 ，与SI／R组相比，SI／R+HBSP组AKT、roTOR及 p70S6K的磷 酸化水 均显著提高 (P0．05)；与SI／R+HBSP组相比，sI／R+HBsP+LY294002组的AKT、roTOR及p70S6K的磷酸化 水 均显著下降(P0．05)，SI／R+HBSP+雷帕霉素组roTOR磷酸化水平及 p70S6K磷酸化水平显著下降(P0．05)。 结论：HBSP能够抑制缺血 ／再灌注诱导的CMECs的损伤，其保护作用可能与PI3K—AKT／mTOR信号通路激活有关。 关键词 促红细胞生成素衍生肽；心肌微血管内皮细胞；缺血 ／再灌注损伤；细胞凋亡 InvestigationofHelixB-surfacePeptidcProtectingtheCardiacMicro-vascularEndothelialCellInjury byIschem ia／reperfusioninExperimentalRats WANGChen，SIRui，ZHANGMing—ming，YUWen-jun，HAOQi—meng，ZHANGRong—qing，WANGHai—chang． DepartmentofCardiology，XijingHospital，FourthMilitaryMedicalUniversity，Xi’an(710032)，Shan’xi，China CorrespondingAuthor：WANGHai—chang，Email：wanghc@fmmu．edu．cn Abstract 0bjective：ToinvestigatetheeffectofHelixB—surfacepeptide(HBSP1reducingthecardiacmicro—vascular endothelialcells(CMECs)injurybyischemiar／eperfusion(I／R)inexperimentalratswithpossiblemechanisms． Methods：TheCMECswereisolatedfrom SD ratstoestablishI／R model，andthecellsWererandomlydividedinto 4groups：① Controlgroup，②