气血并治方有效组分干预ApoE-基因缺陷小鼠动脉粥样硬化实验研究.pdfVIP

中医药发展与人类健康 气血并治方有效组分干预ApoE一基因缺陷小鼠 动脉粥样硬化的实验研究 刘剑刚1 史大卓1 董国菊1 王永炎2 1．中国中医研究院西苑医院，北京(100091) 2．中国中医研究院，北京(100700) 动脉粥样硬化(atherosclerosisAS)是一种多因素参与、病理环节极为复杂的疾病。病理学研究证 AS斑块形成、动脉管腔狭窄是AS病理改变的最终结局。在AS形成过程中，胶原纤维不断增加并发 生玻璃样变，形成表面为纤维帽，内含脂质、巨噬细胞、平滑肌细胞(SMC)和泡沫细胞纤维斑块； 随着这些病理过程的发展，纤维斑块逐渐演变为粥样斑块。本实验探讨气血并治方对影响AS斑块形 成一些因素的干预作用。 气血并治方由活血化瘀名方血府逐瘀汤化裁而来，是中国中医研究院西苑医院临床治疗动脉粥样 硬化(AS)的有效方药。前期研究表明气血并治方有效组分可抑制血管平滑肌细胞的增值，本研究以 ApoE一小鼠为模型，探讨气血并治方有效组分干预晚期AS的疗效并探讨其可能的作用机制。 一、材料与方法 1．动物6周龄ApoE一小鼠，雌雄各半，由北京大学医学部实验动物科学部提供，批号：SCXK (京)2002—0001。 2．药物及试剂气血并治方(由川芎、赤芍、桃仁、红花、柴胡等组成)有效组分水提取物， 沙东制药有限公司生产，批号：N1080。 免疫组织化学试剂盒，一抗Rabbit 试剂盒及DAB显色剂，均购自武汉博士德生物工程有限公司。 胆固醇0．15％；24周时随机分为4组，每组10只，即中药大剂量组：llg生药／kg；中药小剂量组： 36周时处死检测，处死前一天晚上禁食不禁水。同时取同龄的具有相同遗传背景的C57BL／6小鼠3 只，处死作为普通病理对照。 一2000型，美国TECHNICON公司生产。 病理学测定，每组随机取5个标本，普通光镜观察血管及斑块的形态结构，进行病理形态学描 述；每个标本取3张切片(每隔5张取1张)用显微彩色图像处理，共计15个视野进行测量统计，测 (CA，斑块中除胶原和纤维成分以外的斑块面积)；最小纤维帽厚度(FC)；脂质中心面积与斑块面积 之比(CA／PA)。计算机彩色图像处理系统，lamge型，美国ProPlus(冷泉)公司。 重大疾病论坛891 5．血样处理和病理标本制备小鼠麻醉后，经眼眶采血，分离血清，测定血脂指标。麻醉处死小 鼠，主动脉光镜病理标本制备，取出心脏及主动脉，生理盐水冲洗，从主动脉根部取至主动脉弓， 10％甲醛中固定。常规石蜡包埋，从主动脉根部起间断均匀切片，切片厚度约5um，每只取5张切片 进行HE染色，普通光镜观察形态学改变，显微彩色图像处理系统测量相关病理指标。 ①弹力纤维染色：每组随机取3个标本，每个标本取3张切片进行弹力纤维染色，普通光镜下观 察各斑块中纤维成分的分布与含量，并用图像处理系统测量血管内膜(IMT)厚度，每张切片随机选 取3个不同部位的内膜厚度值，取其平均值进行统计分析。 ②免疫组织化学检查：每组随机取5张切片，根据SABC试剂盒说明书操作。切片常规脱腊，封 加二抗，室温20分钟；滴加SABC，室温20分钟；DAB显色，苏木素轻度复染；脱水、透明、封片， 显微镜观察。每张切片随机采3个视野，每组共计15个视野，计算机图像扫描半定量分析阳性信号 的表达(以灰度值表示)。 巨噬细胞含量，根据上述免疫组织化学ABC法操作，滴加一抗CD68，封片后显微镜观察并计算 机图像分析其表达强弱，以其阳性信号面积表达率表示其含量多少，血管平滑肌细胞含量：滴加一抗 a一肌动蛋白，其余操作同上。 6．统计学处理：采用sPSS 12．0软件包进行统计学处理。数据用均数±标准差(i±s)表示，计 量资料前后对比采用配对t检验，组间对比采用单因素方差分析，计数资料用Y2检验，以PO．05 作为显著界限。 二、结果 1．气血并治方提取物对ApoE一小鼠血脂的影响 模型组和小剂量组比较均显著升高(P0．01)。 表1气血并治方有效组分提取物对ApoE一小鼠血脂的影响(36周。n=10。) 分组 剂量TC(mm