利用类病毒脂质体抗原检测H5N1亚型禽流感病毒抗体ELISA方法的建立.pdfVIP

动物 医学进展 ，2015，36(1)：5—10 ProgressinVeterinaryMedicine 利用类病毒脂质体抗原检测 H5N1亚型禽 流感病毒抗体 ELISA方法的建立 杨 倩 ．u，朱道 中z，薛春宜 ，李晓明 ，曹永长 卜，段燕喻 ，王 莹 ，吴晓薇 ，刘志玲。 (1．中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室，广东广州 510006；2．广东出入境检验检疫局 检验检疫技术中心，广东广州 510623；3．中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 ，北京 lO22O6) 摘 要 ：利用昆虫杆状病毒表达系统制备 了HSN1亚型禽流感病毒 (AIV)HA蛋 白、类病毒脂质体和 病毒样颗粒 ，分别作为包被抗原，建立 了相应的检测 H5N1亚型禽流感病毒抗体的ELISA方法。特异性试 验、敏感性试验 、重复性试验和稳定性试验结果表明，利用 3种抗原包被所建立的ELISA方法均具有 良好 的 重复性和稳定性，批间和批 内变异系数均小于 1O％，但单独表达的HA蛋 白和类病毒脂质体特异性更好 ，而 且类病毒脂质体有更高的免疫反应性 ，与灭活全病毒相比安全性更高，故在 H5N1亚型AIV抗体水平检测 方面更具有应用前景。 关键词：昆虫杆状病毒表达系统；禽流感病毒 ；类病毒脂质体；抗体检测 中图分类号：$852．659．5 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2015)01—0005—06 禽流感 (Avianinfluenza，AI)是 由正黏病毒科 研究的VLP是利用流感病毒 HA和 M1两个结构 A型流感病毒属的流感病毒引起的一种禽类重要传 蛋 白形成的。 染性疫病。该病于 1878年首次报道于意大利 ，自从 对于流感病毒 VLP的应用主要在疫苗研制领 1959年高致病性 AI首次报道以来 ，全世界共暴发 域和免疫测定领域。在疫苗研制方面，因为 VLP疫 了32次 ，每次都给养禽业造成 了巨大损失 ，其中较 苗既避免了病毒的感染性 ，又具有疫苗 的有效预 防 为受关注的有 1959年英格兰 H5N1亚型 AI、1994 的可能性 ，因此较为理想。现 已报道 的有 H1N1、 年墨西哥 AI、1997年香港 AI、2004年亚洲 H5N1 H3N2、H5N1、H7N1、H5N3及 H9N2亚型流感病 亚型 AI及 2013年倍受关注 的 H7N9亚型 AI事 毒 VLP，动物试验证明这些流感病毒 VLP可诱导 件 [1]。该病影响范 围大 ，对人 、畜、禽 的健康均构成 产生保护性免疫应答反应。现阶段研究表 明，流感 了极大 的威胁。 目前根据禽流感病毒 (Avianinflu— 病毒 VLP疫苗可诱导产生较高的免疫效价 ，并且可 enzavirus，AIV)致病性 的不 同，可分为高致病性 诱导产生交叉免疫反应 ，同时不含核酸安全性较高。 AIV、低致病性 AIV和非致病性 AIV3大类。迄今 但 目前研究大多停 留在动物试验和临床前试验的阶 为止 ，高致病性 AI基本是 由H5亚型或 H7亚型 段。现在 VLP在免疫测定 中也有了一定得应用 ，主 AIV引发 的 ]。为 了有效地 防控 AI，国内外政府与 要包括在抗体检测的应用和抗原检测的应用。 学者给予了该病极大的关注 。 传统意义上的脂质体亦称类脂小球 ，它是 由磷 AIV 的一个重要 的结构蛋 白血凝素 (HA)是大 脂双分子定向排列而成的，其直径约为几微米至几 小为 75ku的糖蛋 白，具有凝集部分动物红细胞 的 毫米，是人工制备的颗粒，其组成包括不溶性的极 功能，是主要的表面抗原。基质蛋 白(M)包括 2个 性的磷脂质和胆 固醇等附加剂 。由于其制备简单、 蛋白M1和 M2，其 中M1蛋白是病毒颗粒 的主要组 安全性高、靶向性高、无免疫原性反应等受到人们的 分 ，与病毒 的组装和 出芽相关_3]。病毒样颗粒 (vi— 广泛重视 。利用重组杆状病毒感染宿主细胞，病毒 rus—likeparticles，VLP)是含有特定病毒 的一个或 大量出芽后 ，会导致宿主细胞的细胞膜破裂 ，破碎的 多个结构蛋白