芜菁皱缩病毒P38蛋白的原核表达及抗血清的制备.pdfVIP

2015年 3月 四川大学学报 (自然科学版) M ar． 2O15 第 52卷 第 2期 Journa1ofSichuanUniversity(NaturalScienceEdition) Vo1．52 NO．2 doi：103969／j．issn．0490—6756．2015．02．039 芜菁皱缩病毒 P38蛋 白的原核表达及抗血清的制备 ， 张 静 朱 峰，陈应娟，邓星光，刘 健，林宏辉，席德慧 (四川I大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部 国家重点实验室，成都 610064) 摘 要 ：从感染芜菁皱缩病毒 (TCV)的拟南芥 中提取总 RNA，通过反转录 PCR(RT—PCR) 扩增得到 TCV 的外壳蛋 白基 因P38．在 目的基 因 ORF框两边 引入酶切位 点 BarnH I和 SacI，并连接到表达我体 pET30一a上，导入 大肠杆 菌 BL21(DE3)中，37℃经 0．5mM ／L IPTG诱导 6h后 获得 了分子量约为 48kD 的融合蛋 白．经 Ni—NTA 纯化 目的蛋 白，注射大 白兔制备抗血清．Westernblot结果表 明制备好 的抗血清能成功检测感染TCV的拟南芥． 关键词 ：芜菁皱缩病毒 ；外壳蛋白；原核表达 ；抗血清制备 中图分类号 ：Q78 文献标识码 ：A 文章编号 ：0490—6756(2015)02—0441—05 ProkaryoticexpressionofP38from TurnipCrinkleVirusand preparation ofitspolyclonalantibody ZHANGJing，ZHUFeng，CHEN ging—Juan，DENGXing～Guang， LIUJian，LIN Hong—Hui，XIDe-Hui (KeyLaboratoryofBio—resourcesandEco—environmentofM inistryofEducation， CollegeofLifeSciences，SichuanUniversity，Chengdu610064，China) Abstract：Thenucleotidesequenceofthecoatprotein (P38)geneofTurnipcrinkleviruswasobtained usingRT—PCR from ArabidopsisthalianainfectedwithTCV．RestrictionenzymecuttingsitesofBamH IandSac1wereintroducedtotheORFfragmentofP38．Thenthefragmentwaslinkedtogetherwith PET30一aandtransformedintoE．coliBL21(DE3)．Thetargetfusionprotein(48kD)wasinducedbv 0．5rnM ／LIPTGat37℃ for6h．TheexpressedproteinwaspurifiedbyNi—NTAandanti—P38polyclonal antibodywaspreparedusingrabbit．W esternblotresultsshowedthattheantiserum couldbeusedtode— tecttheexpressionofP38ininfectedArabidopsisthaliana． Keywords：TCV；Coatprotein；Prokaryoticexpression；Preparationofantiserum 轻微扭 曲，有时 出现更严重 的植株畸形或丛矮． 1 引 TCV除了易通过机械接种传播外 ，还可 以靠跳 甲