p―STAT3 与HER2在乳腺癌分子亚型中表达的相关性分析.docVIP

p―STAT3 与HER2在乳腺癌分子亚型中表达的相关性分析 　　摘要：目的 探讨p-STAT3（磷酸化的信号转导和转录激活因子3）及人类表皮生长因子受体-2（HER2）在乳腺癌分子亚型中的表达及其相关性。方法 根据Nielsen标准进行分子分型的59例乳腺癌组织切片，应用免疫组化技术检测p-STAT3及HER2的表达水平。结果 在乳腺癌各分子亚型中，p-STAT3均有表达，且可观察到p-STAT3在细胞核内的定位。在腺腔A型、腺腔B型、HER2过表达型、基底样型乳腺癌中，p-STAT3的表达率分别为21.42%、83.33%、83.33%、66.67%， p-STAT3与HER2在乳腺癌分子亚型中的表达水平呈正相关关系（r=0.452，P0.01）。结论 p-STAT3与HER2在乳腺癌分子亚型中的表达水平呈正相关关系。 　　关键词：乳腺癌；分子分型；免疫组织化学；p-STAT3；HER2 　　乳腺癌是近年来发病率持续增高的女性恶性肿瘤，其高度异质性导致临床预后的多态性。近年来，不少学者根据分子基因的表达，将乳腺癌分类成不同的亚型[1]：Luminal亚型（ER/PR+）、HER2过表达型（ER-、PR-、HER2+）、Basal-like（ER-、PR-、HER2-）型和Normal-like型，并发现不同分子亚型乳腺癌的预后有显著差异[2]。HER2是原癌基因CerB2编码的具有受体酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白，属表皮生长因子受体家族，与肿瘤形成密切相关[3]，过表达HER2乳腺癌的侵袭性增强[4]。STAT3作为HER2的下游分子，是信号转导和转录激活因子家族（signal transducer and activator of transcription，STATs）中重要成员，已被确定为癌基因[5]，因其本身及其磷酸化形式（p-STAT3）在多种肿瘤组织和细胞系中持续激活和异常表达，转移及血管生成有关[6]，且p-STAT3可促进抗凋亡基因的表达，有拮抗某些化疗药物的作用，其与乳腺癌的相关性研究成为近年来恶性肿瘤信号通路研究的热点[7]。在乳腺癌的分子亚型中，HER2的过表达是否伴随着p-STAT3的高表达即二者的相关性研究尚无文献报道，因此本实验拟通过检测p-STAT3在乳腺癌组织各分子亚型中的表达情况，并分析其与组织中HER2表达的相关性，探讨STAT3是否可作为乳腺癌分子分型的补充，为乳腺癌患者的分子靶向治疗提供帮助。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 收集2012年9月～2013年9月徐州医学院附属医院病理科有完整切片和石蜡档案及病历资料的浸润性乳腺癌病例59例及乳腺纤维腺瘤病例10例，其中乳腺癌腺腔A型14例，腺腔B型15例，基底样型13例，HER2过表达型17例。试剂：兔抗人p-STAT3抗体及兔抗人HER2抗体购自美国EPITOMICS公司。MaxVision快速法试剂盒、柠檬酸盐缓冲液等试剂购自迈新公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1免疫组织化学法检测p-STAT3表达 p-STAT3抗体1：200浓度稀释，室温静置备用。主要实验步骤：①脱水：65°C 烤箱中干烤30 min；②脱蜡：二甲苯I中浸泡15 min，之后二甲苯II中浸泡15 min；⑴在无水乙醇I、无水乙醇II、95%酒精、80%酒精、70%酒精中分别浸泡各5 min；⑵双蒸水中浸泡5 min；③微波修复抗原：将切片浸入枸橼酸修复液，先高火2 min将沸未沸时转至低火，持续约5 min；⑴室温下PBS洗涤5 min×3次；⑵3%双氧水室温孵育5-10 min；⑶室温下PBS洗涤5 min×3次；④封闭：滴加正常羊血清封闭液（A试剂），37°C 孵育10-15 min；⑴滴加p-STAT3一抗，37°C 2-3h，后室温下PBS洗涤5 min×3次；⑵滴加二抗（B试剂），37°C ，30 min，室温下PBS洗涤5 min×3次；⑶滴加C试剂，37°C ，30 min，室温下PBS洗涤5 min×3次；⑤DAB显色：滴加新鲜配置单DAB显色液，室温下放置3-10 min，至显棕色为止，蒸馏水终止反应，并洗涤；⑥苏木素复染，3-4 min后流水冲洗；⑦分化：1%盐酸酒精中浸泡1-2 s后流水冲洗；⑧蓝化：氨水中浸泡30s-1 min后流水冲洗；⑴脱水；⑵透明；⑶中性树胶封片，显微镜下观察。 　　1.2.2免疫组织化学法检测HER2表达 兔抗人HER2抗体按预实验结果1：200稀释，室温静置备用。步骤同免疫组织化学法检测p-STAT3表达状况。 　　1.3结果判断 　　1.3.1组织p-STAT3表达水平的结果判定 免疫组化染色结果根据阳性细胞的数量和染色深度综合判断，以细胞浆和/或细胞核中出现清晰棕黄色颗粒为阳性细