介导纳豆激酶分泌表达的信号肽比较.pdfVIP

现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2014，Vo1．30，No．5 介导纳豆激酶分泌表达的信号肽 比较 何孝天，刘中美，崔文璩，周哲敏 (江南大学生物工程学院，工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡 214122) 摘要：以纳豆芽孢杆菌 (Bacillusnatto)的基因组为模板，PCR分别扩增编码信号肽、前导肽、成熟肽的前纳豆激酶原基因序列 (pre-pro．nk)，编码前导肽、成熟肽的纳豆激酶原基因 (pro—nk)，构建了含有三种不同信号肽的纳豆激酶重组质粒 pMA0911一 wapA-pro—nk、pMA0911-yncM-pro—nk、pMA0911-pre-pro—nk(m)。通过3种信号肽介导的纳豆激酶的分泌表达、酶活性质分析等实验 结果表明，wapA信号肽9#-的纳豆激酶的分泌效率以及纤溶酶活性最高。对 wapA信号肽介导的纳豆激酶表达产物进行了纯化，纯 化倍数及回收率分别为2．15和21．5％。酶学性质分析结果表明重组纳豆激酶的最适温度、最适pH分别为5O℃和pH8．0，纳豆激酶 在温度低于60℃及pH5．0～11．0比较稳定。本研究为纳豆激酶的基因工程改造以及进一步提高纳豆激酶在枯草芽孢杆菌中的表达量奠 定了一定的 出。 关键词：纳豆激酶；信号肽；表达；酶学性质；纳豆芽孢杆菌 文章篇号：1673—9078(2014)5—62—68 Comparison0fSignalPeptidesforNattokinaseSecretoryExpression HEXiao-tian，LIUZhong-mei,CUIWen-jing，ZHOUZhe-min (TheKeyLaboratoryofIndustrialBiotechnology,MinistryofEducation，SchoolofBiotechnology,JiangnanUniversity, i214122．China) Abstract：Thegenepre-pro—nk(encodingsignalpeptide，propeptideandmaturepeptide)nadpro—nk(encodingpropeptideandmature peptide1wereamplifiedfrom BacillusnattochromosomebyPCR．Threerecombninatvectors(pMA0911-wapA-pro—nk,pMA0911一 yncM-pro—nkpMA0911-pre-pro—nk(m))withdifferentsignalpeptideswereconstructed．Overexpressionofnattokinasewiththosedifferent signalpeptideswereachievedinB．subtilisexpressionsystem ．Th erecombinnatnattokinasewithwapA singalpeptidewasexpressedathte highestlevel，nadexhibitedhtestrongestfibrinolyticactivity．Therecombinnatnattokinasewaspurified，nadhtepurificationfactornadactiviyt recoveryofthenattokinasewere2．15nad21．5％．respectively．Th eenzymaticpropertywasnaalyzed．Th eoptimalpHnadtemperaturewere8．0 nad50℃．respectively．AndtherecombinnatnattokinasewasstableatpH of5． 11．0andtemperatureoflessthna 60℃．Th isstudycouldbe usefulforgeneticreconstructionofnattokinasenadimprovementofexpressionlevelofnattokinaseinB．subtilis． Keyword