冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶ELISA检测方法的建立及应用.pdfVIP

现代食品科技 ModernFoodScienceandTechnology 2014，Vo1．30，No．9 冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶 ELlSA 检测方法的建立及应用 李轶 ’，范大明 ，顾震南 ’，黄建联 ，连惠章。，赵建新 ’，陈卫 ’，张灏 ’ (1．江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡 214122) (2．福建安井食品股份有限公司，福建厦门 361022)(3．无锡华顺民生食品有限公司，江苏无锡 214218) 摘要：本文研究了冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶 (MTG)的双抗体夹心酶联免疫检测方法 (sandwich-ELISA法)，以抗 MTG兔多抗为包被抗体，抗MTG鼠单抗为检测抗体，再结合HRP标记的抗IgG1二抗，构成sandwich．ELISA检测方法，对冷冻鱼 糜中是否添加MTG进行定量检测，防止冷冻鱼糜原料掺假。实验结果表明，包被抗体的最佳工作浓度是2．00~gr／nL，检测抗体的最 佳工作浓度为0．10~gm／L，酶标二抗的最佳稀释倍数为 1：5000。方法的检测限为20ngm／L，该检测方法在0．6mgm／l_~10mgm／L范围 内OD45n值与MTG浓度的log值呈线性关系 建立掺假冷冻鱼糜样品模拟体系，测定其中MTG的添加量：MTG的添加回收率为94％ 以上，测定过程中回收率结果的板内变异系数为 1．12％~4．02％，板间变异系数为5．43％--6．87％。经试验证明该方法灵敏度高，样品前 处理简便，适用于冷冻鱼糜中MTG的定量检测。 关键词：微生物谷氨酰胺转胺酶冷冻鱼糜双抗体夹心酶联免疫检测法 文章篇号：1673．9078(2014)9-275—279 DOI：10．13982j／m．fst．1673-9078．2014．09．045 ELISA-·basedM ethodtoDetectM icrobialTransglutaminaseinFrozen Surimi LIYi，FANDa．ming，GU Zhen．nan，HUANG Jian-lian2LIAN Hui-zhangaZ=HAoJian-xin，CHENW ei， ， ， ZHANGHao (1．StatenKeyLaboratoryofFoodScienceandTechnology,SchoolofFoodScienceandTechnoloyg,JiangnanUniversity, Wu)(i214122，China)(2．FujianAnjoyfoodShareCo．Ltd．，Xiamen361022，China)(3．Wu)i【HuashunminshengFoodCo． Ltd．．WuXi214218．China) Abstract：In thisstudy,asnadwich-type enzyme-linked immunosorbentassay (ELISA)wasdevelopedto detectmicrobial transglutaminase(MTG)inrfozensurimi，usingrabbitanti—MTGpolyclonalnatibodyasthecapturenatibodyandmouseanti-MTGmonoclonal antibodyasthedetectionantibody．Combniedwihtnati-IgG1secondaryantibodyhorseradishperoxidase(HRP)conjugate，htesandwichELISA Was develope dtoquantitativelydetectMTG ni rfozensurin1