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j pggyBac转座子生产转基因动物研究进展 麓熟燃j髋要臻， #要n ±产#基目＆女“#在哺“≈*自胞十∞高＆转座∞研i．i在}*∞￡展十￡善t￡概47 PB转座干±产#基目自#∞原 i岔j：兰篇j篷喾；：；驽嚣辫’“”8”““““””+ 接多角体病毒内首敞分离得到的㈦。PB转座于是目前哺乳动物体系中昂商教并-Ⅱ以稳定遗传的转鹰}。PB转座子 不仅能高触整台外源基因到宿上的生殖系细胞摹因组，同时^部分以单拷贝的方式整合外撩摹凼。而且整合位点可 转化效率．携带14kb的外源基网时，Uj然具有较高的转化活性。更重要的是。PB转座子L经在部分哺乳动物咀及大 家畜猪的生{卉细胞系tp实现了精确高效地转座。士夸，在大家告转基凼研究中，尤其足生物反麻器的研究中，转座于 的应用还未见报道。 1 m转座于生产转基因动物的原理 PB转座子在结构上(结构如图所不)与I【型短的插^重复凶r棚芙，属于真棱生物的第二类型转座子，即 自主Ⅲf，全K 放阅读框fORn，编码1个68h的转座酶，该转座酶是转座子高额率的切出和转座所需的oq。pB转座子的末端是长 PB转 座子反向重复序列的5’末端以2～3个c碱基结束，3’末端的G碱摹在切出位点的选择过稳中起作用。谚转座子转 座频率较高，且总是在竹AA棱苷酸月标位点处插^，用而被归八竹AA特殊的可转移园予家族。 3bD 1 BkboRF 31酏 圈1响强批转庄子结构示童圈1 座，切出和插^时都需要其本身编码的转座酶的作用，并发生在特征性订AA棱苜酸序列H标位点。其转座机理是， PB转庠子在转座酶的作用下从供体染色体P切F，供体染色体技切断成为两段，然后往蹦A连接酶的作用下重新 连接起来；目标染色体的特定位置仃TAA位点)桩切扦．末端为粘性末端。切下的PB转座子在转座酶的作用下与切 开的目标染色体术端连接并补齐末端。这样在转移到U标染色体上的PB转座r两侧就出现，TTAA重复序列。 2髓转座子生产转基因动物的研究进展 2．1舶转座子生产转基因昆虫的研究进展 利用PB转座子能够在摹园组中准确地切山和插入的特性，通过对阳转座于的改造，健其在转座时携带外源犟 圆进入基因组中，计且允许这些新的基因表达或使某个基因先活，从而达到对动物的基因组进行改造的目的获得转 基吲动物。自从c埘肄“首次发现PB转幢于后，有人研究证明它能在多种昆虫中进行转座，并以多拷贝存在于受体 转庳酶的辅勘质粒以两种不同的浓度比(500u咖I、I50lJ 细胞．转化细胞数约为总细胞数的3％．5％。结果发现，在第一个分离得到的转染株系中，盲两个整合得到了15代的 稳定遗传，从1日得到了PB转座r介导的转基州地中海果蝇。《今为fr研究人员应用阳实现r对12种昆虫的牛殖 系细胞遗传转化””，衷一列举了闱外研究^员利用PB转座r获得的转基凶昆虫。 ：豁：螺；嚣：鬻黜麓：翟嚣被．麓端嚣：慧鬻：；瑟：?“8””’ ’mmn#^《M【1962，)，∞ⅫR＆tE栅【_刊妯-@剿cducn 160 中固畜牧兽医学会动物繁殖学分会第f叫届学术研讨会论文集 表1国外利用pi绍yB∞转座子获得的转基因昆虫阿 国内对j二PB转座子的研究起步较晚，主要是将PB转座了用于转基因家螽的研究，并取得了不小的成绩，成 功建立了家蚕丝腺生物反应器的构建平台。最早从事此研究工作的是四JII师范大学的李维等…】，他们将A3启动 子片段(不含信号肽序列)与PB转座酶编码区融合构建成辅助质粒，同时将其(含信号肽序列和部分编码区)与 nuorescent 报告基冈多管水母绿色荧光蛋白基因GFP(green 复序列之间，成功构建了基于PB转座子的转基因表达载体，实现了对家蚕转基冈的初步研究。2005年，代久红等 因系，大部分转基因系在基因组上携带有2个或多个插入拷贝，并且在整个项目过程中转基因的表型稳定遗传6 cA3EG，并显微注射到胚盘形成前期的蚕卵中，结果检测到绿色荧光，表明该载体能在蚕卵中正常表达。曹广力等