肠产毒性大肠埃希菌F4ac菌毛蛋白FaeG亚单位的原核表达及免疫学鉴定.pdfVIP

2O4 ChineseJournalofMicmecology，Mar．2011，Vo1．23No．3 文章编号：1005-376X(2011)03-0204-04 【论 著】 肠产毒性大肠埃希菌 F4ac菌毛蛋白FaeG亚单位的原核表达及免疫学鉴定 于拽拽 ，杨致邦 ，周裕珍 ，熊玉霞 ，胡洪铭 ，蒋任举 (1．重庆医科大学神经科学研究中心，重庆 400016；2．海南裕昌龙实业有限公司大昌养猪场，海南 海 口 570125) 。 【摘要】 目的 克隆并表达肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)F4ac菌毛蛋白亚单位 FaeG，为制备预防幼畜ETEC 感染的疫苗奠定基础。方法 以ETEC(C83902)基因组 DNA为模板，PCR扩增血 G基因，插入原核表达质粒 pGEX-6P-1，构建重组质粒pGEX-faeG。将pGEX—faeG转化大肠埃希菌BL-21，IPTG诱导表达。SDS—PAGE分析表 达蛋白的相对分子质量和表达形式，Westernblot鉴定其抗原性。将表达菌超声破碎后离心提取包涵体制备抗原， 经 口灌喂免疫小鼠，检测小鼠血清中抗FaeG的lgG、IgA，鉴定其免疫原性。结果 扩增的faeG基因全长786bp，与 基因文库中的血 G基因同源性达96％。重组质粒 pGEX．faeG经 PCR及双酶切鉴定确有插入片段，且序列完整。 表达产物FaeG相对分子质量约53kD，主要存在于碎菌后的沉淀中，以包涵体形式表达。Westernblot显示该蛋白 可与ETECF4ac阳性血清特异性结合 ，免疫后小鼠血清抗 FaeGIgG、IgA明显高于PBS和GST对照组。结论 成 功构建了ETECF4ac菌毛蛋 白亚单位 FaeG的重组质粒pGEX．faeG，表达了重组蛋白FaeG，该蛋白具有良好的抗原 性和免疫原性，可用于研制预防幼畜ETEC感染的疫苗。 【关键词】 肠产毒性大肠埃希菌；菌毛亚单位 FaeG；表达；抗原性；免疫原性 【中图分类号】R378．21 文【献标识码】A Prokaryoticexpression and immunologicalidentification ofF4acFimbrialSubunit FaeG ofETEC YUZhuai—zhuai， GZhi—bang，ZHOUYu—zhen，Ⅺ0NGYu—xia，HUHong—ll1iIlg，JL Gaen-jv (1．InstituteofNeuroscience，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China；2．DachangPigFarm，Hainan YuchangLongIndustrialCo．， ，Haikou570125，China) 【Abstract】 Objective TocloneandexpressF4acfimbrialsubunitgenefaeGofEntemtoxigenicEscherichiacoli (ETEC)inordertoestablishafoundationforpreparingthevaccinetopreventETECinfectionofyounganimals．Method ThefaeGgenefragmentofETEC(C83902)genomicDNAwasamplifiedbyPCRandinsertedintoprokaryoticexpression plasmidpGEX-6P-1．TheconstructedrecombinantplasmidpGEX—faeG wastransformedintoE coliBL-21nadexpressed throughinductionofIPTG．Theexpressedproductwas determinedofrofmr andrelativemolecularmassbySDS—PAGE