视网膜血管瘤增殖基因小鼠模型的建立.pdfVIP

维普资讯 主国痘理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(2)：408—410 [文章编号] 1000—4718(2008)02—0408—03 · 实验技术 · 视网膜血管瘤增殖基因小鼠模型的建立 王凯军， 姚 克 (浙江大学医学院附属第二医院眼科中心，浙江 杭州310009) [摘 要] 目的：建立视网膜血管瘤增殖(retinalangiomatousproliferation，RAP)基因小鼠模型，并对 RAP的 病理学特点进行分析。方法：应用化学诱变剂N一乙基一N一亚硝基脲 (ENU)对C57BL／6J(B6)种系小鼠进行诱 变和筛选，用间接眼底镜观察突变鼠眼底表现；超薄切片观察视网膜组织学变化；荧光染色后激光共聚焦显微镜下 观察视网膜血管异常表现。结果：用ENU诱导RAP突变小鼠呈稳定的常染色体隐性遗传，出生后3周眼底可见 黄 白色病灶、视网膜血管瘤样增生和视网膜深层新生血管增殖等典型 ARP病理学改变。结论：用 ENU诱导可成 功建立 ARP基因小鼠模型，进一步完善该模型将推动ARP的深入研究。 [关键词] 视网膜血管瘤增殖；黄斑变性；模型，动物 [KEYWORDS] Retinalangiomatousproliferation；Maculardegeneration；Models，animal [中图分类号] R363 [文献标识码] A 视 网膜 血管瘤增 殖 (retinal nagiomatousproliferation， 定义为诱变不充分 ，不再用于进一步实验。将筛选出的充分 ARP)是1种近年来新发现的老年人致盲眼病，其病因和病理 诱变雄性小鼠与C3H雌性小鼠合笼 ，繁殖产生 F1代小鼠，将 学特点仍不明确，临床上也无确切有效的预防和治疗方法， F1代小鼠与C3H小 鼠交配产生 代小鼠，将 代小鼠与 在眼科界备受关注…。如何建立稳定可靠 的RAP动物模型 Fl代小鼠回交得到 F’3代小鼠。散瞳后用间接眼底镜对 F’3 是进行AR P研究的难点。由于ARP是 1种特殊类型的由视 代小鼠逐个进行眼底检查，将筛选出的小鼠进行眼底照相。 网膜血管瘤增殖引起的黄斑变性，因此无法利用常规的物理 3 视网膜组织学观察 或化学方法建立实验动物模型 ，一直以来制约着 ARP研究的 分别选取出生后3周的正常和纯合子突变小鼠，二氧化 开展。本研究应用化学诱变剂 ，采用基 因诱变和筛选的方 碳吸人处死后取眼球，除去角膜和晶状体 ，将保 留完整视网 法，成功建立了AR P基因小鼠模型，为开展 ARP的病因学和 膜的眼杯放人固定液 (2．5％戊二醛 。2％甲醛，0．1mol／L甲 病理学研究打下了实验基础 ，为探讨 ARP的治疗措施提供了 次砷酸钠)中4℃过夜。0．Imol／L甲次砷酸钠洗 3次后 ，将 可利用的研究模型。 标本放人 l％四氧化锇溶液中置于4℃6h，室温下用双蒸水 洗 3次，每次 10min，梯度丙酮脱水，环氧树脂包埋。将包埋 材 料 和 方 法 好的标本放人60℃烘箱72h烘干，超薄切片 (I m)，甲苯 胺蓝染色后置于光学显微镜下观察并拍照。 1 主要试剂和仪器 N一乙基一N一亚硝基脲 (ENU。Sigma)；环氧树脂 (TedPel- 4 视网膜血管荧光染色 分别选取出生后3周的正常和纯合子突变小鼠，将荧光 la)；甲苯胺蓝 (Sigma)；间接眼底镜(Heine，Omegal80型)；眼底照