血管紧张素Ⅱ1型受体牵张激活位点的筛选.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(3)：427—431 · 427 · [文章编号] 1000—4718(2009)03—0427—05 血管紧张素 II1型受体牵张激活位点的筛选 牛玉宏， 邹云增 ， 王翔飞， 徐丹令， 梁艳艳 ， 马 桢 (复旦大学附属中山医院心血管病研究所，上海200032) [摘 要] 目的：寻找血管紧张素 Ⅱ1型受体 (angiotensinIItype1receptor，AT1受体)上的机械负荷感受位 点。方法：制备AT1受体不同位点的突变体，转染既不表达血管紧张素 II(angiotensinⅡ，AngII)也不表达AT1的 COS7细胞，Westernblotting法检测细胞牵张后细胞外信号调节激酶 (ERKs)的磷酸化水平。结果 ：构建了C76A、 K199Q、H256A、Q257A、C289A、C296A、K199Q／H256A、K199Q／Q257A8种突变体。COS7细胞转染 AT1受体以前， AngⅡ和牵张刺激都不tt3I起细胞内ERKs磷酸化升高；而转染野生型AT1后，AngII和牵张刺激引起细胞内ERKs 磷酸化明显升高，各突变体中，Q257A和C289A转染细胞后细胞对牵张刺激的反应受到明显抑制 ，提示 AT1的牵 张感受位点在Q257A和C289A。结论：结果提示AT1受体上位于257位的谷氨酰胺和289位的胱氨酸在机械牵 张引起的AT1受体激活中起了重要作用。 [关键词] 受体 ，血管紧张素；牵张感受器；COS7细胞 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Screeningthestresssensitivesitesofangiotensin lItypeIreceptor NIUYu—hong，ZOUYun—zeng，WANG Xiang—fei，XU Dan—ling，LIANGYan—yan， MA Zhen (InstituteofCardiovascularDiseases，ZhongshanHospital，FudanUniversity，Shanghai200032，China．E—mail：ZO1g． yunzeng@ 一hospita1．sh．ca) [ABSTRACT] AIM：Tofindoutthestresssensitivesitesinangiotensin IItype1receptor(AT1receptor)． METHODS：AT1receptormutantswereconstructedbyPCR from wildAT1receptor．Theplasmidwitl1wildAT1receptor oritsmutantswastransfectedintoCOS7cellsthatexpressneithernagiotensinⅡ (AngII)norAT1receptor．Westemblot— tingwasusedtodetectthephosphorylatedextracellularsignal—regulatedkinase(ERKs)．RESULTS：Eightmutnatsof AT1wereconstructed(C76A，K199Q，H256A，Q257A，C289A，C296A，K199Q／H256A，K199Q／Q257A)．Before transfeetedwithAT1，neitherAngⅡnorstretchincreasedtheactivationofERKs．AftertransfectedwithAT1，pretreatment withAng11for8minorstretchofr10minactivatedERKsobviously．However，hteactivationofERKswassingificantly suppressedaftertheCOS7cellsweretransfectedwithC289AnadQ257A．TheresultindicatedthatC289AandQ257A werethestr