肿瘤相关线粒体蛋白12对肝癌细胞凋亡的抑制作用.pdfVIP

· 220 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(2)：220—225 [文章编号] 1000—4718(2009)02—0220—06 肿瘤相关线粒体蛋白12对肝癌细胞凋亡的抑制作用：}： 金 姝 ， 王 俐 ， 王 颖 ， 谢 国化 ， 陈惠娟 ， 王树军 ， 张惠珍’， 张 勇 ， 葛 瑜 ， 葛海 良 (上海交通大学医学院 上海市免疫学研究所，。公共卫生学院营养与食品卫生系，上海 200025) [摘 要] 目的：探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对肿瘤细胞凋亡的抑制作用。方法：(1)构建重组 逆转录病毒表达载体并转染包装细胞PA317，将获得的病毒颗粒感染TAMP12低表达的肝癌细胞株HepG2。应用 RT—PCR检测TAMP12mRNA表达变化；激光扫描共聚焦显微镜 (CISM)观察双色荧光标记蛋白的亚细胞定位和 定量表达。(2)应用Hoeebst33258染色和FACS检测 5一氟尿嘧啶(5一FU)处理后对诱导HepG2细胞凋亡的影 响。结果：(1)CLSM检测显示TAMP12主要表达于HepG2细胞线粒体 中。转染细胞中TAMP12基因和蛋白呈稳 定高表达。(2)5一FU诱导细胞发生凋亡后 ，转染细胞的核形态较为完整，但对照细胞的染色质发生凝聚、边缘化、 核固缩；且 FACS检测显示转染细胞的凋亡率显著低于对照细胞 (P0．05或P0．01)。结论：TAMP12具有抑制 肝癌细胞凋亡的作用。 [关键词] 肿瘤相关线粒体蛋白12；线粒体 ；逆转录病毒载体；HepG2细胞 ；氟尿嘧啶；细胞凋亡 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Inhibitoryeffectsoftumorassociatedmitochondrialprotein12onHepG2 cellapoptosis JINShu ，WANGLi，WANGYing，XIEGuo—hua，CHENHui—juan，WANGShu— jun，ZHANGHui—zhen，ZHANGYong，GEYu，GEHai—liang (ShanghaiInstituteofImmunology，NutritionandFoodHygieneDepartment，PublicHealthCollege，ShanghaiJiaotong UniversitySchoolofMedicine，Shanghai200025，China．E—mail：gehailiang@yahoo．corn．cn) A『BSTRACT1 AIM ：Toexploretheinhibitoryeffectsoftumorassociatedmitochondrialprotein12(TAMPI2)on tumorcellapoptosis．METHODS：(1)Aretrovirusexpressionvectorwasrecombinatedandtransfectedintothepackaging celllinePA317．ThevirusparticleswereobtainedtoinfectthetargetcelllineHepG2lowexpressingofTAMP12．Theex— pressionofTAMP12mRNA wasdetectedbyRT—PCR．ThesubeellularlocalizationandquantificationofTAMP12protein labeledwithdoublefluoresceinwereobservedundercmffoeallaserscanningmicroscope(CLSM)．(2)Hoechst33258stai— ningandflowcytometry (FACS)wereusedtoanalysistheapoptosisofHepG2ceilstreatedwith5一fluorouracil(5一FU)． RESULTS：(1)TheCLSMobservationshowedthatTAMP12proteinwasmainlyexpresse