重组Ad-Cp-CDglyTK双自杀基因腺病毒载体构建及体外抑制鼻咽癌细胞的实验研究.pdfVIP

维普资讯 理生理杂--L．ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(2)：215—219 · 2l5 · [文章编号] 1000—4718(2008)02—0215—05 重组 Ad·Cp·CDglyTK双 自杀基因腺病毒载体 构建及体外抑制鼻咽癌细胞的实验研究 王国慧 ， 何军芳 ， 樊 卫 ， 吴沛宏 (中山大学肿瘤防治中心 核‘医学科，影像与介入治疗中心，广东 广州 510060； 中山大学中山医学院免疫学教研室，广东广州510080) [摘 要] 目的：构建含EB病毒cp启动子的CDglyTK双 自杀基因靶向腺病毒载体Ad—Cp—CDglyTK，探讨 cp启动子能否特异性调控 自杀基因在转染鼻咽癌细胞中表达及靶向性治疗鼻咽癌的可行性。方法：采用 pDC316 穿梭质粒系统 ，高保真 PCR扩增 tk、cd、cp等基 因序列，采用定向克隆方法构建含 cp启动子的双 自杀基因 pDC316一CP—CDglyTK重组质粒 ，经DNA测序 、酶切法鉴定所构建质粒，在293细胞中进行重组腺病毒Ad—Cp— CDglyTK包装、扩增 、纯化与病毒滴度测定 ，体外转染鼻咽癌细胞株 CNEI与正常鼻咽NP69细胞株，RT—PCR法检 测转染细胞中CDglyTK基因的表达，MTY法观察Ad—Cp—CDglyTK／GCV+5一FC系统对CNEI细胞株的体外杀伤 作用。结果 ：经DNA测序 、限制性酶切法分析显示pDC316一Cp—CDglyTK含完整正确的tk、cd、cp基 因序列，在 293细胞中包装扩增后病毒滴度为5．6x10 TCID50／L，体外转染鼻咽癌CNEI细胞株与正常鼻咽NP69细胞株后 ， 采用 RT—PCR法从CNEI细胞株总RNA中扩出Cp片段，而NP69细胞株未检测到相应基因mRNA表达，MTY结 果显示经前体药物处理转染后CNEI细胞株与NP69细胞株，5一FC+GCV联合用药较单一前体药物对CNEI细胞 具有更强的抑制作用(P0．05)，联合用药对NP69细胞株未见明显杀伤作用。结论 ：Cp启动子可以特异性调控 CDglyTK融合 自杀基因在鼻咽癌细胞株 (CNEI)中表达，融合 自杀基因／前药系统较单一基因对鼻咽癌细胞具有更 强的杀伤作用。 [关键词] 鼻咽肿瘤；Cp启动子；腺病毒 ，人；基因疗法 [中图分类号] R739．63 [文献标识码] A AntitumoreffectsofrecombinantvectorscarryingCDglyTK suicidegene on nasopharyngealcarcinomacellin vitro WANGGuo—hui，HEJun—fang ，FAN Wei，WUPei—hong (DepartmentofNuclearMedicine，DepartmentofImagingandInterventionalRadiology，CancerCenter，SunYat—senU- niversity，Guangzhou510060，China；DepartmentofImmunoloyg，ZhongshanSchoolofMedciine，SunYat—senUniversi— ty，Guangzhou510080，Chn／a．E—mail：fanwei@mail．sysu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：ToconstructtherecombinantadenoviruscarryingfusionsuicidegeneCDglyTKwiththeC promoter(Cp)，oneofthekeyfactorsincontrollingEpstein—Barrviruslatentgeneexpression，andtoinvestigateiftheCp mediate