重组人肝细胞生长因子在人脐带间质干细胞中高效表达.pdfVIP

· 2450· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(12)：2450—2454 [文章编号] 1000-4718(2008)12—2450—05 重组人肝细胞生长因子在人脐带间质 干细胞中高效表达木 刘安民 ， 罗 铭 ， 李 国。， 蔡望青 ， 李方成 ，邓跃飞 ， 潘伟生 (中山大学孙逸仙纪念医院 神经外科，肿瘤科，广东 广州510120；香港中文大学，中国香港) [摘 要] 目的：构建能表达人肝细胞生长因子(hHGF)的pWPI—hHGF载体 ，并将含hHGF基因的重组慢 病毒载体转染人脐带问质干细胞(hUCMSCs)，观察人脐带间质干细胞中hHGF的表达情况。方法：将携带 目的基 因hHGF的pUC—SRa／hHGF质粒亚克隆到真核细胞表达载体pWPI载体上，构建重组质粒pWPI—hHGF。基因测 序进行HGF的鉴定。用磷酸钙沉淀法，将pWPI—hHGF、pAX2、pMD2G共同转染包装细胞293T细胞 ，获得携带 目 的基因hHGF和GFP基因的重组慢病毒pWPI—hHGF。将pWPI—hHGF及阳性对照质粒pWPI—GFP分别用 Lipo· fectamin2000介导转染体外培养的hUCMSCs。在荧光显微镜下计数，确定阳性对照质粒的转染数，从而估计该基 因的转染效率。蛋白印迹法检测 HGF和GFP蛋白的表达，ELISA法检测细胞上清液hHGF含量。结果：DNA测序 显示hHGF基因成功地插入到pWPI载体中。包装细胞293T转导pWPI—HGF质粒后，转染阳性率达 100％。阳性 对照质粒转染人脐带间质干细胞24h后，在荧光显微镜下观察，其转染效率达80％以上。蛋白印迹法检测靶细胞 中hHGF表达呈强阳性 ，而对照组表达量极低，两者差异显著(P0．叭)。检测收集转染hHGF后的人间质干细胞 上清液中hHGF的表达含量明显高于对照组(P0．O1)。结论：构建的在真核细胞 内表达 hHGF的重组质粒 pWPI—hHGF转染人脐带间质干细胞，能获得hHGF基因在人脐带间质干细胞中大量、稳定的表达。 [关键词] 肝细胞生长因子 ；慢病毒载体；载体构建 ；脐带间质干细胞；基因表达 [中图分类号】 R363 [文献标识码] A Highlevelexpressionofrecombinatedhepatocytegrowthfactorinhuman umbilicalcordmesenchymalstem cells LIU An—min ，LUO Ming ，LIGuo ，CAIWang—qing‘，LIFang—cheng ，DENG Yue — fei．POON Wai—sang (DepartmentofNeurosurgery，Departmentof Oneology，MemorialHospital，SUN Yat—senUniversity，Guangzhou 510120，China；ChineseUniversityofHongkong，Hongkong，China．E—mail：docliuam@yahoo．con．ca) [ABSTRACT] AIM：Toconstructalentiviralvectorencodinghumanhepatocytegrowthfactor(hHGF)fortrans— fection，andtoobservetheexpressionofhHGF inhumanumbilicalcordmesenchymalstem cells．METHODS：pUC — SRot,／hHGFwassubclonedintotheexpressionvectorpWPItoconstructrecombinantpWPI—hHGF．hHGFwasidentified bygenesequence．RecombinantlentiviruswasproducedbypWPI—hHGF，pAX2andpMD2Galtogethertransienttransfee— tioninto293Tcellsusingcalc