重甲基SILAC技术分析雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞组蛋白H3甲基化的差异.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJoumalofPathophysiology 2014，30(9)：1595—1602 · 1595 · [文章编号] 1000—4718(2014)09-1595-O8 重 甲基 SILAC技术分析雄激素依赖性和非依赖性 前列腺癌细胞组蛋 白1-13甲基化的差异 王启林 ， 李瑞乾 ， 金从国 ， 赵 斌 ， 张国颖 ， 白 宇 ， 雷永虹 (昆明医科大学第三附属医院泌尿外科 ，云南省肿瘤研究所，云南 昆明650118) [摘 要] 目的：整体分析雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞组蛋 白H3甲基化差异 ，探讨前列腺癌从 激素依赖性发展为非激素依赖性 的表观遗传机制。方法：应用重甲基细胞培养条件下氨基酸稳定同位素标记 (SILAC)技术结合生物质谱分析雄激素依赖性前列腺癌细胞 LNCaP和非依赖性前列腺癌细胞 DU145组蛋白H3 的甲基化修饰谱 ，寻找差异的修饰位点和模式；通过Westernblotting验证所发现的差异修饰；采用real-timePCR检 测2株细胞相关甲基化酶和去甲基化酶的表达差异。结果：质谱鉴定发现2株前列腺癌细胞的组蛋 白H3存在5 个甲基化 位 点，甲基化 模 式分别 为 H3K14me2、H3R17mel、H3K36mel、H3K36me2、H3K36me3、H3R72me2、 H3K79me1和H3K79me2。其中，包含甲基化位点H3K36的肽段有2种，分别为 “KSAPATGGVKKPHR”和 “KSAPST- GGVKKPHR”，前者鉴定到的频数高于后者 ，两者的区别在于第31位的氨基酸分别为 A与S，前者归属于组蛋白 H3变异体H31T、H31和H32，主要出现在DU145细胞中，后者归属于组蛋白H3变异体H33，在LNCaP细胞中出现 次数稍多；提示2株细胞可能表达不同的组蛋白m 变异体 ，从而导致甲基化模式的差异。Westernblotting检测发 现H3K36的一甲基化和二甲基化在2株细胞间没有差异，而其在 DU145细胞中的三甲基化程度显著高于LNCaP 细胞。Rea1．timePCR检测显示 DU145细胞的H3K36去甲基化酶mRNA表达比LNCaP细胞有所降低。结论：组蛋 白H3变异体和H3K36去甲基化酶的差异表达可能导致非激素依赖性前列腺癌细胞H3K36三甲基化增加，成为前 列腺癌从激素依赖性发展为非激素依赖性的一种表观遗传转变。 [关键词] 前列腺肿瘤；组蛋白H3；臼基化 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2014．09．010 Analvsis0fdifferentmethylation patternsofhistoneH3between andro- gen--dependentandandrogen--independentprostatecancercellsbyheavy methylSILAC WANGQi．1in，LIRui．qian，JINCong．guo，ZHAOBin，ZHANGGuo—ying，BAIYu， LEIYong．hong (DepartmentofUrologicSurgery，TheThirdA．ff~liatedHospitalofKunmingMedicalUnivemity，YunnanCancerInstitute， Kunming650118。China．E—mail：leiyonghon~’1@suho．corn) [ABSTRACT] AIM：Tostudytheepigeneticmechanismsinvolvedintheevolutionofprostatecancerfromallan— drogen-dependentstatetoanandrogen-indepent·entstate，nadtheglobal differenceofhistoneH3methylationbetweenan— drogen-dependentand—independentprostatecancercells．METHOD