酸枣仁汤对运输应激模型大鼠心肌氧化损伤保护作用.pdfVIP

第四届京津冀一体化畜牧兽医科技创新研讨会 兽医学部分·中兽医学 暨“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛 I论文集 酸枣仁汤对运输应激模型大鼠 心肌氧化损伤的保护作用 韩丹丹1。曹瑞丹1，万长荣1．尹朋1．刘凤华“．许剑琴” 1．中国农业大学动物医学院，北京海淀100193；2．北京农学院动物科技系，北京昌平102206 摘要：目的探讨酸枣仁汤对运输应激模型大鼠心肌损伤的保护作用。方法 建立大鼠运输应激 模型，应激条件为60f／m n，每次2小时，应激组分别处理1、2、3天后，通过H．E．染色观察心肌组织 形态学的变化，检测心肌组织中丙二醛 MDA 、超氧化物歧化酶 SOD 、谷胱甘肽过氧化物酶 SOD、一氧化氮合酶 iNOS 、一氧化氨 NO 含量。探究酸枣仁汤对运输应激模型大鼠心肌氧化损伤 的影响。结果酸枣仁汤可显著升高运输应激模型大鼠心肌组织SOD水平，明显降低MDA、lNOS 和NO的含量。结论酸枣仁汤能够减轻大鼠运输应激时心肌的氧化损伤．其可能通过氧化及抗氧 化因子的表达发挥作用。 关键词：酸枣仁汤；大鼠；运输应激；心肌；氧化损伤 1 引言 激模型大鼠心肌氧化损伤的影响。 应激是机体对外界或内部的各种刺激所产生的非特异性 2材料与方法 反应，适当的应激对机体有利，而过强或维持时间过长的应激 2．1试验动物 会引起组织损伤甚至疾病的发生。目前应激反应已成为现代 60日龄sD雄性大鼠35只 北京维通利华试验动物技术 集约化养殖业不可回避的问题，严重影响畜禽的生长、发育及 有限公司提供 ，体重为200±log。 生产性能，甚至引起畜禽碎死。公路运输引起的畜禽应激反 2．2试验主要试剂和仪器 应是造成畜禽应激综合征的重要因素之一，导致动物的健康 皮质醇RIA试剂盒：北京科美东雅生物技术有限公司； 状况、肉品品质和生产性能下降，给畜牧业造成巨大的经济损 TRIzOL 失㈨1。 运输应激因其危害严重，畜牧生产中以药物防治作为防 gen公司；全蛋白提取试剂盒：南京凯基生物科技发展有限公 制畜禽应激反应的主要手段pJ。目前，有关酸枣仁汤的研究 司：MDA检测试剂盒：南京建成牛物科技有限公司。 不少学者做了，大量的工作，主要侧重于其镇静催眠作用，但有 关于酸枣仁汤的抗氧化能力的研究报道较少【41。 本文中所用的酸枣仁汤是在经典方剂酸枣仁汤的基础上 加人神曲组成的汤剂，然而对于其是否具有抗氧化作用及其 RM 在兽医临床中应用效果还不清楚。因此．本试验通过建立大 22RcentrifuEe高速冷冻离心机：BeckmanC0ulter公司；IX71／ 鼠运输应激模型，研究酸枣f_ 汤对运输模型大鼠所致心肌组 织抗氧化能力水平改变的调节作用，探讨酸枣仁汤对运输应 B10RAD公司；单人双面净化丁作台：中国苏州净化设备有限 公司；FA2004电子天平：』二海舜字恒平科学仪器有限公司。 国家“十二五”科技支撑计划重点项目 2011BAD34啪1 ；农业邯公益 性行业 农业 科研专项项目 座机电话号码0—10 2．3试验动物分组及处理 十通讯作者：许剑琴，Email：xuji8nqincau@126com；刘凤华，Emall：1I— 选20只60日龄sD雄性大鼠随机分为4组，每组5只：第】 ufen曲ual209@126．c劬 组为正常对照组，第2组为应激l天组，第3组为应激2天组，第 271 _第四届京津冀一体化畜牧兽医科技创新研讨会 论文集 l暨“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛 兽医学部分·中兽医学 4组为应激3天组。购进大鼠适应性饲养7天后，于第8天应激检测MDA、n-一znsOD、总s0D的含量，具体操作步骤按试 组开始用摇床模拟运输状态，每天9：00—ll：00进行处理，处理剂盒说明书进行。另取90～100“g冻存的心肌组织进行组 条件为35℃，60r／血，20h／次，正常对照组不做任何处理，第2 260／A 组处理】天，第3组处理2天，第4组连续处理3天。 定RⅣA的纯度和浓度，A 280比值在】．8—2．1之间的 基于前面试验，选15只印日龄sD雄性大鼠随机分为3组，RNA用于反转录。两步法用于RNA反转录，反转录产物cD- 每组5只：第l组为正常对照组 c ，第2组为应激模型组 T NA于一20℃保存。 前期试验筛选出模型条件为60r／而n，20h／次，35℃，连续3 2．6荧光定量PCR检测大鼠心肌组织氧化相关基因 天 ，第3组为中药预防组 M 酸枣仁汤19生药／kg体重，灌 Premier 胃 。购进大鼠适应性饲养7天．于第8天中药预防组每天给予 基因序列，采用Primer 5．O软件分别设计相应的引 酸枣仁汤 】∥l g 灌胃，连续7天，第14天应激模型组和中药预