表面等离子共振技术检测人乳头瘤病毒亚型在宫颈病变中的临床应用.pdfVIP

w‘Hnds】cervical 【K-ey lesions；hulTlanpapillomavirus；surfaceresonance；nuorescenceinsitu plasnlon hybrid渤tion；te— l咖erase gene CIIinJClinObstet Gynecol，201l，12：252—255 子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，一种 或多重致癌性HPV亚型的感染是导致宫颈癌发病 的主要原因。目前，已经分离得到118种不同的亚 型，其中有40种与生殖道感染相关，12种为致癌反应，使用sPR仪检测。 型[1]。HPV检测可降低官颈癌及癌前病变的漏诊 3．DNA克隆测序：PCR产物分离纯化后行 率。目前，临床上使用的HPV检测方法为HC2， 但无法分型检测。基于表面等离子共振技术(sur—和跹)R方法检测的HPV—DNA结果进行比较。 face plasrnonresonance，sPR)的sPR生物传感 4．FISH技术检测TERC基因的表达：按照 器可通过检测sPR信号改变对HPV进行分型检文献[4]介绍的方法进行操作。 测，该新技术已应用于临床陋3I。本研究应用S脓 四、统计学处理 生物传感器分型检测}珏)v一价认，联合H晓和 用SPsSl3．O软件进行统计学分析，采用x2检 陬C方法探讨其在宫颈病变筛查中的临床意义。 验，以P．0．05为有统计学意义，若理论频数≤T．5 但T≥1，并且n≥40，采用连续性校正的x2检验。 资料与方法 结 果 一、一般资料 选取2006年7月至2009年3月在北京大学人一、宫颈病理学结果 民医院妇科门诊就诊的109例行宫颈癌筛查的患者 109例患者病理学结果：正常／炎症26例， a[N1 12 作为研究对象，患者年龄20～77岁，平均年龄 24例，CIN214例，CIN333例，SCC (39．84±9．85)岁。全部患者均为初次筛查，未接例。 受过宫颈治疗。’ 二、HPV感染情况 二、主要试剂和仪器 基因组DNA提取试剂盒(TIANGEN，离心 柱型)、GLPTERC／CSP3DNA探针(北京金菩 嘉医疗科技有限公司)、胶原酶B(Gibco)和胃蛋 sPR生物传感器阅读仪 白酶(sigma)。W2600 (北京金菩嘉医疗科技有限公司)。 各组比较，差异无统计学意义(P均o．05)。 三、方法 1．宫颈脱落细胞采集和处理：采用液基细胞 学(TCT)宫颈刷取宫颈外口鳞柱交界处脱落细 胞，置于TCT保存液，4℃保存，用于宫颈细胞 3及90C)比较，高危型}Ⅱ)v感染率比较，差异有 学、SPR和TERC基因检测。宫颈细胞学按照 统计学意义(Po．01)，见表1。 TBS(2001)分类，ACsI，S及以上患者阴道镜下 取活检行病理学诊断。 病理学洲2组(正常／炎症、洲1)与≥ 吲2组比较，HQ、g，R法}珏)V阳性率比较，差 2．sPR检测HPV：常规方法提取宫颈脱落 细胞中的总DNA，以HPV各型别共有片段设计 引物，PCR扩增(37℃10min，94℃4min；94℃ 20s，48℃45s，72℃20s，40个循环；72℃5min， 4℃保存)，扩增产物中加入阳性对照流池内控品扩