根皮苷对日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的抑制作用.pdfVIP

性疾病f”。研究表明，毗喹酮治疗后未成熟虫卵仍可继续发育，虫卵肉芽肿反应仍在继续，而且一 旦肝纤维化达到一定程度，即使去除诱因，肝纤维化仍将继续12刁】。因此，在虫卵肉芽肿形成阶段和 肝纤维化早期如何用药物干预、控制其发展，成为吡喹酮治疗后控制血吸虫性肝病发展的关键。然 而，至今尚无高效低毒药物用于血吸虫性肝病的治疗。 存在于苹果属多种植物中，在根、茎、叶和果实中均有分布。与其它黄酮类相比，二氢查尔酮苷在 自然界存在很少，被称为“少数黄酮类”【4】。根皮苷具有多种生物活性，如降血糖【51、平衡雌激素【6】、 抗氧化、保护心脏、并对急性肝损伤有保护作用[7-91等，这使它在很多领域中得到应用。本课题以日 本血吸虫感染小鼠作为肝纤维化模型，观察根皮苷对小鼠肝纤维化的作用。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1药物及试剂根皮苷：天然产物研究与利用湖北省重点实验室(三峡大学)提供，从湖北海棠中 提取分离得到，纯度为98％。由天然产物研究与利用湖北省重点实验室(三峡大学)提供。复方鳖甲 软肝片，内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司，批号吡喹酮片，南京制药厂有限公司， 盒购自南京建成生物工程研究所，小鼠血清透明质酸(HA)ELISA试剂盒为上海研吉生物科技有限 公司提供的美国RD systems产品，其他试剂皆为分析纯。 环境下，饲养笼饲养，自由饮水，以全价颗粒饲料喂养【3】。感染中国大陆株日本血吸虫尾蚴的阳性 钉螺，购自江西省寄生虫病防治研究所。 1．2方法 1．2．1感染及分组按常规将钉螺放入去氯离子自来水中逸出尾蚴，小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫 尾蚴40～50条／只，然后随机将未感染和感染日本血吸虫尾蚴昆明小鼠分成A～D4组，每组10只。 未感染空白对照组(A)、模型组(B)、复方鳖甲软肝片组(C)、根皮苷组(D)。于感染后第 喹酮灌胃治疗后，C组给予灌胃复方鳖甲软肝片1000 d，D组灌胃根皮苷40mg／ me,／(kg·d)x60 (1【g·d)x60d，A组和B组均以生理盐水灌胃作对照。 1．2．2检测指标和方法(1)血清样品收集 h后摘眼球取血， 末次给药后，禁食不禁水过夜，24 体操作方法按照试剂盒说明书进行。(2)肝组织样品处理 取小鼠肝脏，用4℃预冷生理盐水冲 尽表面浮血，滤纸拭干、称重，按肝体指数=[肝脏重量(g)／体重(g)】x100％公式计算小鼠肝体指 数，然后取小鼠肝脏右叶同一部位切成4mm薄片，4％中性甲醛固定，石蜡包埋，制作厚4¨m连 续切片，苏木素一伊红(HE)染色，光镜观察肝组织中虫卵肉芽肿的大小；胶原纤维染色(Masson染色)， 光镜观察胶原沉积情况，并应用图像分析系统计算胶原纤维面积。每只小鼠做1张切片，每张切片 随机取5个视野，计算每个视野中蓝色胶原分布的面积，其和为该切片纤维化面积，用于判断肝纤 维化程度；另取肝组织0．1 g测定其HYP含量，操作方法按照试剂盒说明书进行。 1．3统计学处理 13。0处理。 所有数据均以X+S表示，统计方法采用单因素方差分析，统计数据采用SPSS 2结果 2．1血清HA、ALT、AST含量 与A相比，B组和C、D组血清中HA、√岍、AST含量均升高，其中B组最高。而C、D组 与B组相比，均能显著降低血清中√蝴、AST、HA含量(P0．05或，尸O．01)。(表1) 2．2肝组织中HYP含量 A组中HYP含量极低，模型组B和各治疗组C、D肝组织中HYP含量均明显升高，其中模型 组最高。而C、D组与模型组B相比，根皮苷和鳖甲软肝片均能显著降低肝组织中HYP含量(P o。05或PO．01)，也能明显降低小鼠的肝体指数(P0，05或PO。01)(表1)。 表1根皮苷对血清HA、ALT、AST、肝体指数、肝HYP、肝胶原面积的影响 TablelEffects Oil areaarid ofphloftdzincollagen HYPofliver,hepatic