平板法测定血清溶菌酶活性影响因素探讨.pdfVIP

} 一j ． 12 ． 确 萌酶 —一 平板法测定血清溶菌酶活性影响因素探讨 江苏省连云港市第一人民医院 (222002) 云 譬 似 2 测定溶菌酶活性对某些疾病 的诊断与鉴别诊断 1、2、3mm，测得溶菌环直径 (n=5)分别为： 有重要意义。为了提高平板法测定涪苗酶 活性的准 混音血清；lmm，90m ；2mm 5mm；3ram．72mm 确性 ，我们对此法的实验条件作了探索，现将 总结如 溶菌酶标 准：lmm．11．5mm；2ram，10．3mm 舢m 下 。 10．1mm． 一 、 试剂 1．将 M ·LysodeEktlcus腐生微球 随着琼脂厚度增加 ，其直径缩小 ，以 2mm厚度溶苗 菌接 种于营养琼脂上 37℃培养 24～36h，用生理盐 环最为清晰。 水洗下菌苔，200oe离心 15mln．击上清，沉淀用生理 4．琼脂浓度对测定结果的影响 配制琼脂浓 盐水洗 2次，离心后将沉淀菌体置于培养皿中，低温 度为 1 、1．5 和 2 ，观察其对结果的影响，结果 玲冻干燥 ，冻干菌体研成细柑后分装小瓶 ，密闭置冰 见表 1 箱冷冻室保存。2．pH 6．4l／15mol／LPBS。3．古营 表 1 琼脂浓度对结果的影响(ram) 琼 脂平 板 用上述 PBS配制 的 2 琼 脂 (含 0．2 NaN )加热融化 ，取 18ml加入用 PBs配制 的 2mg／ m1菌棱 18ml，混匀后浇注 15×8cm 平板 ，凝固后放 4℃lSmin，用 4ram直径打孔器打孔 ，孔距 15ram。 结果表 明，涪菌环大小随琼脂浓度的增加而逐渐缩 = 、方法 每孔加入 5～500#g／ml溶 菌酶标 准棱及待测标本 2O ，均做双扎 ，37℃．14～18h，测 小，以1 浓度琼脂溶菌环最大 ，且边缘清晰、整齐 。 用培养皿代替玻板 ，制成凝胶板厚薄不匀 ，因而影响 溶苗环直径 ．于半对数纸上以涪菌酶浓度为纵座标 ． 溶苗环直径为横座标，绘制出标准曲线． 测定结果的准确性，我们认为应以平板玻璃作载体 三、结果和讨论 为好 。 1．苗扮制备方法对结果 的影响 文献报道的 5．反应沮度及时间 据文献 推荐的方法反 菌柑处理方法有三种 ，即(1)丙酮一乙醚法 、(2)加热 应温度 为4℃、25℃和 37C，为此 ，我们对这三种温 煮拂法和 (3)冻干活菌法 ．三种方法对涪菌酶活性测 度条件下测定结果进行现察 ，见表 2。 定，以涪菌环直径 (mm，n=5)表示 ，颤次得 表 2 反应温度对结果的影响(ram) 音血请 ；(1)7．90ram．(2)7．87ram．(3)7．∞rm ． (反应时间 18h) 落苗酶标准；(1)9．8gram，(2)9．83ram，(3)9．80r衄 ． 捧 葺 ■ 古 量 ／m1) 375 7．50 l 125 31．25 B250 125 250 500 结果表 明三种方法所得的涪菌环直径 无显著差异 ， 但以活菌的涪菌环最为清晰。 25℃ 5．50 B00 7．S0 8∞ S50 9．1O 1