胆胃舒颗粒预防胆囊结石及对胆囊收缩素受体(CCK-AR)基因表达的影响.pdfVIP

由广州中医药大学附属深圳市中医院制剂室所制。 (四)饲料： ①标准豚鼠饲料②胆固醇致石饲料：(标准豚鼠饲料：95．45％，酪蛋白1％，蔗糖I．5％，猪油 1％，纤维素l％，胆酸0．02％，胆固醇0．05％)其中：酪蛋白：广东环凯微生物科技公司提供，批 号：200302417；胆固醇：广州器化医疗设备有限公司提供，批号：030705；纤维素：广州器化医 动物中心提供。许可证号：scxx(粤)2003．0002。 (五)所需主要仪器：冻存管、液态氮管。 (六)实验用的刀、剪、镊子、及玻璃制品均20012高温2h烘烤处理． 二、实验方法 (一)动物分组及处理 ①分组：将豚鼠90只随机分为3组，每组30只，①空白组：喂养普通饲料409，只；②模型组： 喂养胆固醇结石诱石饲料409／对只；③治疗组：喂养胆固醇诱石饲料409／刃只，并防石胶囊溶液 腹组禁食24小时，豚鼠眼眶处注射空气致死，剖开腹腔，用血管钳阻断胆囊管，取下胆囊、用注 射器抽出胆汁以备检测。餐后组禁食12小时后，给液体脂餐15ml／kg体重灌胃，30min后剖腹取材， 备检测胆囊收缩功能等； (2)胆囊平滑肌组织样本的提取与保存：完整取下胆囊，纵形剪开，收集胆汁沉积物，滤纸 吸净；然后去掉粘膜及浆膜，保留平滑肌，然后将平衡肌组织装入冻存管并置入液氮罐中保存。 (--)胆囊平滑肌CCK．ARmRNA的测定 物的PCR产物进行电泳，扩增片断凝胶成像，经图像识别系统进行吸光度扫描，计算 CCK．AR／p-actin积分比值，以光吸收度积分比值作为CCK．AR基因表达的半定量指标。 (三)胆囊成石状况、胆囊收缩功能测定。 ①胆囊成石情况判定：解剖胆囊。以肉眼观察胆囊内有无胆石或胆泥，若胆汁内存在成型、粗 大颗粒者定性为结石，其成份用红外光谱分光光度计定性。②胆囊收缩功能：剖腹后自然状态下测 缩功能=(餐前体积—餐后体积)／餐前体积x100％ (四)统计学方法： 率法。2、结果分析：显著性检验取双侧界值点，P0．05时，差异具有统计学意义． 三、结果 本研究共有5只动物死亡(占总样本数的5．6％)，其中模型组中有3只动物死亡，治疗组中有 2只动物死亡。 1．各组动物胆囊胆石发生情况：以肉眼所见棕黑色泥沙样结石及絮状沉淀物作红外光谱鉴定 为胆固醇结石作为成石标准：模型组成石率为92．59％，治疗组成石率为10．71％，显著低于模型组 (尸0．05)。见表l： ·344· 表I各组动物成石率比较 注：与模型组比较，。：P0．05。 2．各组豚鼠胆囊收缩功能变化：与模犁卵!匕较，治疗组胆囊收缩功能增强(尸0．05)；见表2。 表2各组胆囊收缩功能比较 注：与模型组比较，。：P0．05。 mRNA基因表达增 3．各组胆囊平滑肌CCK-AR基因表达：与模型组比较，治疗组CCK．AR 强(，0．05)，见表3。 表3各组胆囊平滑肌CCK．AR基因表达比较 注：与模型组比较，。；P0．05。 四、讨论 胆囊是重要的消化器官，也是一个免疫器官。胆囊切除后会出现一系列的后患，因此，保留胆 囊、去除结石的临床研究十分活跃，微创保胆内镜取石术就是一种较有前途的保胆治疗胆囊结石的 方法，与其他保胆方法比较(如体外碎石、溶石、排石等)取净率明显提高，其不足之处同其它的 保胆方法一样是存在一定的复发率。而中医药预防结石复发的方法具有疗效好、可兼顾调理肝胆脾 胃等脏腑功能、长期应用副作用少、病人易于接受等优势。 我们经过长期观察，发现采用内镜微创保胆取石术(MC)后，运用利胆健脾法为主方药治疗 取得了一定的疗效，而要阐明利胆健脾法为主方药在治疗胆囊结石方面的科学性及可行性，对其治 疗机理的研究是非常有必要的。本研究中，运用胆胃舒颗粒治疗后，胆囊收缩功能增强，结石成石 率低，证明利胆健脾方药确有预防结石复发的作用。分析其机理：治疗组CCK．ARmRNA表达明 显高于模型组，说明利胆健脾方药是通过提高CCK-ARmRNA表达，进而加强胆囊收缩功能，促 进胆汁排出，减少了结石的形成。同时证明胆囊收缩功能下降，胆汁淤积，是胆囊结石产生的病理 基础。 中医理论认为，胆囊结石的形成