缺血性脑卒中大鼠肝损害及与肠源性内毒素血症的关系研究.pdfVIP

2011年北京医学会肠外肠内营养学分会学术年会论文汇编 缺血性脑卒中急性期可出现多脏器功能损伤，严重可引发多器官功能衰竭而增加致残率和 死亡率。胃肠道和肝脏应激性损伤是常见的受累脏器之一，并被认为是全身应激性炎症反应的 cerebral artery 始动和扩大器官[1．3】。本研究拟通过线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(middle 化，以及肝组织和肠粘膜的超微结构改变，探讨缺血性脑卒中大鼠发生性肝损害的机制及与肠 粘膜屏障损伤和肠源性内毒素血症(GET)的关系。为临床实施干预提供理论依据。 l材料与方法 1．1实验动物及分组 48只健康雄性Wistar大鼠，体重200220 g(购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实 cerebral 闭塞(middleartery MCAO组参考改进的Longa法闭塞左侧大脑中动脉诱导建立局部脑缺血大鼠模型。MCAO组大鼠 相关指标和测定，每组动物8只。 1．2MCAO模型的建立 cerebral 参照Longa等[2】描述的管腔内线栓技术闭塞左侧大脑中动脉(middleartery 腔麻醉，固定头和四肢，做颈部前正中切口，分离暴露左侧颈部血管，用微动脉夹暂时夹闭颈 总动脉分叉处，永久结扎颈总动脉近心端，于结扎线与颈总动脉分叉之间傲一切口。将头端加 热呈光滑椭圆球形的直径为0．28：b0．02ram尼龙栓线自切口插入，沿颈内动脉主干走行送入，直至 mm)． 感到有轻微阻力为止(进线长约19 1．3神经功能学评分 大鼠清醒后观察神经生物学行为改变情况，参考Longa法[1]进行神经生物学评分(0分：无 神经缺损症状；1分：健侧前肢不能完全伸直；29：向健侧旋转；3分：向健侧倾倒；4分t不 能自己行走或昏迷。1--4分为有效模型)． 1．4脑组织TTC染色 大鼠断头取脑，迅速置于一20℃冷冻箱中冷冻，20min后取出，由前向后行厚2．0mm的冠状切 片，将切片立即置于质量分数为2％的”rC(2，3，5．氯化三苯基四氮唑)磷酸盐缓冲液中，避光37℃ 恒温孵育30min，观察脑组织染色情况。 1．5各项观察指标检测 1．5．1血清ATL、AST检测 左心室取血，血清ATL、AST采用酶学法，全自动生化分析仪检测。 1．5．2血浆LPS含量测定 门静脉取血，鲎试验试剂盒及LPS标准品由上海伊华临床医学科技公司提供，具体操作步骤 按试剂盒说明书进行。 1．6病理组织学观察 取距回盲部5cm回肠末段肠粘膜组织和距肝N2cm肝右前叶肝组织，置于10％甲醛中固定， ·136· 2011年北京医学会肠外肠内营养学分会学术年会论文汇编 常规脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察肝组织和肠粘膜组织的病理改变。4％多聚甲 醛灌注，取回肠末段组织和肝组织，2．5％戊二醛固定。经脱水、置换等步骤后电子显微镜下观 察肝脏和肠粘膜的超微结构变化。 1．7统计学处理 t检验或F检验，相关数据间进行相关性分析，P0．05具有统计学意义。 2结果 2．1神经行为学评分及脑组织TTC染色 大鼠清醒后，对照组未见神经行为学异常表现。MCAO组大鼠均出现一定程度的行为障碍， 主要表现为对侧肢体无力、触觉减低，提尾时对侧前肢屈曲，不能直行仅向对侧转圈并存在患 48h组中有2只大鼠评为3分，其余为2分。模型组大鼠脑组织TTC染色，可见脑组织中存在未染 色区域，为缺血坏死区，提示MCAO模型建立成功。 图1：神经生物学表现可见健侧前肢屈曲。图2：脑组织TTC染色，未染色区域为缺血坏死区。 2．2各组大鼠血清ALT、AST及血浆LPS水平比较： 鼠于脑缺血伤后6h血清AST开始显著升高，24h达峰值；模型组各亚组血浆LPS水平均明显高于 理显示缺血性脑卒中各组大鼠血LPS水平与√岍和AST呈显著正相关(r分别为0．69和O．72， P0