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否通过作用于NFATel及其下游功能基因来调控破胞培养第5天时．各组破骨细胞数与第3天比较均
骨细胞骨吸收功能，从而进一步阐明氟对骨代谢的 显著下降，8mg／L氟组有少数破骨细胞已经破裂死
作用机理。 亡。
l材料和方法 2．3细胞在氟处理5天后。取出骨片进行染色。结
果染氟组破骨细胞骨吸收活性显著低于对照组，在
1．1破骨细胞培养：从雄性C57BL／6小鼠身上提
取骨髓细胞，在含有M—CSF(30 0．5
ng／m1)和RANKLmg／L氟水平就使破骨细胞骨吸收活性显著下
(100 降．0．5ms／L和2mg／L氟组之间骨吸收活性元差
ng／m1)培养液中培养即可获得破骨细胞。
1．2 WST一8试剂盒检测：检测不同氟浓度下细胞 别。8mg／L氟组骨吸收活性远远低于0．5mg／L和
的增殖和生存能力。 2mg／L氟组。
1．3破骨细胞TRAP染色：使用TRAP染色试剂盒2．4氟对破骨细胞骨吸收功能基因表达的影响。本
进行检测．TRAP染色阳性并且细胞核大于等于3次实验，各组NFATelmRNA表达随着细胞培养时
个的细胞计数为破骨细胞。 间的延长而升高。而且，在染氟5天时，染氟组
NFATcl
1．4骨片吸收实验：骨片使用1％甲苯胺蓝染液染 mRNA表达显著低于对照组．特别是8
色，骨吸收陷窝面积(染色阳性区域面积)使用 mg／L氟组与0．5mg／L和2mg／L氟组比较也有显
Plus6．0软件进行分析。骨吸收
OlympusImage—Pro
活性用染色阳性区域面积占统计视野面积的百分 MMP9和CK表达趋势均与NFAl陀l基本一致。
比来表示。 3结论
3．1
1．5常规方法提取细胞总RNA合成为eDNA：使较低浓度氟(2m肌以下)对破骨细胞形成数
用SYBRPremixEx 量无影响，高浓度氟(8ms／L)可能有促进破骨细胞
Taq试剂盒完成定量PCR实
分化和死亡的作用。
验。以B—aetin标准化，采用2。△鲫法计算相对表达
量。各指标引物序列(略)。 3．2氟能够显著降低破骨细胞骨吸收活性。破骨细
1．6统计学分析：(略)。 胞功能的缺失。会影响到骨的重建，进而表现为各
2结果 种骨病。因此，我们推断不同个体骨髓中氟浓度的
2．1在氟浓度为0、0．5、2、8 高低会导致破骨细胞功能差异，由此造成不同个体
mg／L条件下破骨细胞
的增殖和生存能力在染氟24、48、72h各氟浓度组 之间骨病发生情况不一。
之间无差别。 3．3氟降低破骨细胞骨吸收活性的分子机制为通
2．2氟对破骨细胞形成的作用。培养第3天时，染 过抑制NFATcl表达，使它的下游基因c—Sre、
氟8mg／L组破骨细胞数少于其他氟浓度组，并且
8ms／L组巨型成熟破骨细胞数显著多于其他氟浓 骨基质能力减弱，破骨细胞酸化能力受损。破骨细
度组；0、0．5、2 胞蛋白水解酶分泌减少。导致其骨吸收功能降低。
mg／L组间破骨细胞数无差别。当细
不同剂量氟对大鼠切牙成釉细胞的损伤研究
魏玮高彦辉孙殿军
(哈尔滨
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