三黄降糖方对糖尿病大鼠心肌纤维化的病变的干预作用观察.pdfVIP

伸景医学求真·实验研究 号：909086W)。 1．4主要仪器 OLYMPUS BX51型显微镜：奥林巴斯公司；新苗DZF一6030型电热恒温鼓风干燥箱：上海新苗医疗 湖北省孝感宏业医用仪器有限公司。 2方法 2．1造模方法 造模前先用基础饲料适应性饲养1周，留取10只作为空白组。其余80只大鼠预先用高脂饲料 喂养2周，至大鼠体重在200_+209行造模术。造模前先禁食12小时，称大鼠体重，并根据体重用 注射器按40mg／kg给大鼠腹腔注射STZ液。三日后测血糖，大鼠尾部酒精消毒，然后用输液针头刺 破脉尾静脉，用贝朗血糖仪取血测血糖，血糖≥16．67mmol／L为造模成功。 2．2大鼠分组灌胃治疗 把随机分为三黄降糖方组、达美康组、模型组的大鼠分笼饲养。三黄降糖组按成人正常用药15 倍灌胃给药，达美康按20mg／Kg体重灌胃给药，均每日给药一次，模型组和空白组灌胃等体积生理 盐水，各组均按5ml／kg／d；模型组、三黄降糖方组、达美康组火鼠继续喂以高脂饲料4周，4周后 改为普通饲料。空白组直至实验结束只给于普通饮食。实验期间自由进食，自由饮水，温度(20±3) ℃，湿度55-65％，持续喂养10周。 2．3大鼠取材及组织标本的处理 血液，滤纸拭干，以4％中性多聚甲醛固定。组织标本同定24小时后脱水、透明、浸蜡，组织标本 1、FN、LN。 包埋。每组选取8个蜡块，511m石蜡切片。病理染色、免疫组化检测TGF_8 2．4拍片与分析 采用OLYMPUS BX51型显微镜40倍物镜下采集图像，从每张切片中随机选取一个区域，以视野 (×200倍)、(×400倍)拍照。 Plus 使用Image—Pro5．1系统对免疫组化切片染色的阳性表达进行定量分析，为了分析的统一 性，仅选取视野(×400倍)进行图像分析，计算每张图片阳性染色的积分光密度(IOD)值。计量 资料用均数±标准差表示。两纽间比较采用t检验。所有统计检验均采用采用SPSSl7．0软件进行统 计学分析。PO．05为差异有显著性。 3结果 3．1一般情况 造模之后大鼠反应迟钝，活动度差，抓起时明显排便反应，食量增加，多尿更为严重，毛色开 始变黄，毛蓬立状。4周后部分糖尿病大鼠尾部出现瘀血状斑块，以模型组为多。三黄降搪方纽饮 水量、尿量、食量有所减少，体重增加减缓，且精神状态、活动度和毛色比模型组状况好；达美康 337 会罔第十九次仲景学说学术年会论文集 组状态比较好，虽然仍有多饮、多尿、多食症状， 但与模型组相比三大症状明显降低，体重缓慢增 加：空白组状态良好，无多饮、多食、多尿现象， 毛色沽白、毛形光滑顺畅，体重逐渐增加。 3．2免疫组化表达水平比较 SP染色显示，TGF—B 1主要在胞浆表达，即在核周的细胞浆出现褐色颗粒或小块。其中模型组 表达最多，其次是中药组和达美康组，两者差别不大，空白组表达最少。FN主要在心肌成纤维细胞 的细胞膜上表达，即在胞膜上出现明显的褐色纤维丝状物质；其中模型组表达最多，其次是中药组 和达美康组，两者差别不大，空白组表达最少。LN在细胞间质中表达，糖尿病组大鼠心肌细胞周围 有粗乱不规则的深棕色染色物包绕在细胞周围；各组对比模型组表达呈强阳性，其次为达美康组， 再次味中药组，模型组表达最少，仅在细胞周围有淡褐色物质。 TGF—B1、FN、LN在大鼠心肌表达半定量(IoD)结果(x±s) 4讨论 心肌纤维化是糖尿病心肌病的主要病理改变，在心肌的这一系列的病理变化中，肾素一血管紧张 素醛同酮系统、炎症、细胞凋亡、成纤维细胞以及所分泌的细胞因子都参与了心肌的重构。其中 TGFB 1、Fn、LN在其中起关键作用。 转化生长因子81是由112个氨基酸组成的双链二聚体蛋白，具有激素样活性的多肽生长因子， 属TGF—B超家族，是一种多功能的细胞间信号蛋白，调节多种靶基因的表达，在细胞增殖、识别、 凋亡、特殊分化及细胞外基质合成中发挥重要作用具有多种生物学效应。TGF-8l可促进静息态成 纤维细胞向激活态转化，直接促进多种细胞外基质成分产生；诱导成纤维细