一种纳米药物对耐药结核分枝杆菌的作用及其机制的研究.pdf

目 录 1 一种纳米药物对耐药结核分枝杆菌作用及机制研究………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………3 1.3 前言……………………………………………………………7 1.4 材料与方法……………………………………………………13 1.5 结果……………………………………………………………22 1.6 讨论……………………………………………………………45 1.7 结论……………………………………………………………47 1.8 参考文献………………………………………………………48 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………52 2 致谢……………………………………………………………53 纳米技术在结核病中的研究进展（综述）…………………54 3 一种纳米对耐药结核分枝杆菌的作用及机制研究 摘 要 目的：本研究将一种化合物及其三种同类物(A 、B 、C 、D)制备成纳 米药物A’ 、B’ 、C’ 、D’ ，探讨其对耐药结核分枝杆菌的作用及其机制。 方法：（1）经过四联恒温磁力搅拌器，将药物A 、B 、C 、D ，制成 纳米药物A、B’ 、C’ 、D’ ；（2）采用酸罗氏药敏培养基与结核基因 芯片法共同鉴定结核分枝杆菌菌型，选取H37Rv敏感菌株和三株耐药 菌株（分别为耐异烟肼、利福平和耐多药株）为实验对象；（3）实 验分组：实验组：组1纳米药物A’、B’ 、C’ 、D’ ；组2药物A 、B 、C 、 D ；组3为组1、组2分别与异烟肼联合；组4组1、组2分别与利福平联 合；实验组1、组2、组3、组4分别与四种结核菌株作用。对照组： 阳 性对照组，为异烟肼、利福平与四种结核菌株作用；阴性对照组，为 四株结核分枝杆菌菌液组；空白对照组，为米氏7H9培养液；（4 ） 采用四甲基偶氮唑盐 （MTT）法，观察纳米药物A ’、B’ 、C’ 、D’和药 物A 、B 、C 、D单用以及分别与异烟肼、利福平联用对四种结核菌株 的作用; （5）通过基因芯片技术，检测纳米药物C’与耐药结核菌株 作用前后耐药位点荧光值的变化。结果：（1）纳米药物A ’、B’ 、C’ 、 D’ ，药物A 、B 、C 、D单用对四种结核菌株均无抑制作用； （2）单 用异烟肼、利福平对耐异烟肼株、耐利福平株和耐多药株无抑制作用， 对H37Rv敏感株有抑制作用；（3）纳米药物A ’、B’ 、C’ 、D’和药物 A 、B 、C 、D分别与异烟肼、利福平联用对四种结核菌株均有抑制作 用；同时，实验结果显示对耐药菌株的抑制作用随着药物剂量的增加 1 呈现递增趋势，而且耐药菌株对不同药物的剂量依赖程度有所不同； （4 ）与阳性对照组比较，实验组3、实验组4耐药菌株的耐药指数均 有明显下降（p =0 ）；纳米药物A’、B’ 、C’ 、D’与异烟肼、利福平联用 的耐药指数比药物A 、B 、C 、D与异烟肼、利福平联用的耐药指数下 降更明显（p 0.01），不同耐药菌株耐药指数下降的程度也有不同； （5）在纳米药物B’作用后，耐药菌株的耐药位点无改变，但其耐药 位点的基因表达比用药前有所下降，其中：耐异烟肼株的katG基因表 达下降47.5% ；耐利福平株的rpoB基因表达下降了97.3% ；耐多药株 的katG基因表达下降了14.7%，rpoB基因表达下降了60.1% 。结论：(1) 纳米药物A’、B’ 、C’ 、D’和药物A 、B 、C 、D对耐药结核杆菌无抑制 作用；（2）纳米药物A’、B’ 、C’ 、D’和药物A 、B 、C 、D分别与异 烟肼、利福平联用对耐药结核杆菌有抑制作用，并于药物剂量正相关； 前者抑菌作用更强；（3）纳米药物A’、B’ 、C’ 、D’和药物A 、B 、C 、 D可能通过下调耐药结核杆菌的耐药基因表达，使其耐药性降低而发 挥逆转作用；（4 ）纳米药物A’、B’ 、C’ 、D’与经典抗结核药物异烟 肼和利福平联合运用有望成为治疗耐药性结核的有效方法。 关键词: 纳米药物 耐药结核分枝杆菌 作用及机制 2