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摘要
摘要
多环芳烃是一类在环境中有广泛分布的有机化学污染物,具有“三致”(致
畸、致突变、致癌),通过食物链的传递会对生态环境和人体健康造成极大危害。
微生物的降解与转化是消除PAHs污染的有效方式。研究降解菌的遗传控制、探
索代谢途径、解析相关酶系和功能基因,从而构建基因工程菌株用于污染环境的
生物修复是当前的研究热点。
本论文对一株从Ulsan海湾(韩国)沉积物中筛选到的高效PAHs降解菌
US6·1对菲、芘和苯并芘(三环至五环PAH)
Novosphingobiumpentaromativorans
降解特性、差异表达蛋白质组、关键酶基因表达等方面进行了较为系统的研究,
获得的主要结果如下:
1.GC.MS结果显示,新鞘氨醇菌US6.1能高效降解3.5环PAHs,经过24h,
36h和48h后对起始浓度为10ppm的菲、芘和苯并芘的降解率分别可达到
86.62%,31.81%和22.18%;
US6.1
2.在双向电泳(2D.E)分离差异表达蛋白前对Ⅳpentaromativorans
全蛋白提取和电泳过程中的主要影响因子进行了优化,结果表明:以变性剂为
8。000V时能获得理想的蛋白图谱;
3.通过功能蛋白组学分析和串联质谱鉴定,发现了在PAHs诱导下Ⅳ
US6.1产生了的包含PAHs降解,转运和调节因子,碳代谢,
pentaromativorans
氨基酸代谢,核苷酸代谢,特殊功能蛋白和未知功能蛋白在内的七大类功能蛋白;
4.根据环羟基化双加氧酶旺亚基和4.羟基苯甲酸3.单加氧酶的基因序列信
息设计特异性引物,采用反转录实时PCR分析发现这两个基因的表达在不同底
物诱导下均有不同程度的上调;
US6.1在通过环羟基化双加氧酶开环后经一系列的
5.Ⅳpentaromativorans
酶作用后,经3.氧代乙二酸通路中的水杨酸或者邻苯二甲酸支路生成TCA循环
的中间代谢物进入TCA循环并最终降解成H20和C02。
关键词:高分子量多环芳烃,生物降解,蛋白质组学,基因表达,代
谢机制
Abstract
aromatic eoneclassof
Polycyclichydrocarbons(PAHs)alo玛anicpollutants,widely
distributedinthe ale to
mutagenic
environment.Theycarcinogenic,teratogenic,and
food an
chain.Itis efficienttorecoverPAHscontamination
livingorganismsby way
microbialremediation.Itisa fieldtoconstructGenetic
by hotspot Engineering
of contaminated
Microorganisms(GEMs)capablebioremediating environment,
which 011theelucidationof and involvedin
denpends genescorrespondingenzymes
PAHs andthereforetheclarificationof
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