一株源于海洋环境的新鞘氨醇菌降解高分子量PAHs的分子机制研究.pdf

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摘要 摘要 多环芳烃是一类在环境中有广泛分布的有机化学污染物,具有“三致”(致 畸、致突变、致癌),通过食物链的传递会对生态环境和人体健康造成极大危害。 微生物的降解与转化是消除PAHs污染的有效方式。研究降解菌的遗传控制、探 索代谢途径、解析相关酶系和功能基因,从而构建基因工程菌株用于污染环境的 生物修复是当前的研究热点。 本论文对一株从Ulsan海湾(韩国)沉积物中筛选到的高效PAHs降解菌 US6·1对菲、芘和苯并芘(三环至五环PAH) Novosphingobiumpentaromativorans 降解特性、差异表达蛋白质组、关键酶基因表达等方面进行了较为系统的研究, 获得的主要结果如下: 1.GC.MS结果显示,新鞘氨醇菌US6.1能高效降解3.5环PAHs,经过24h, 36h和48h后对起始浓度为10ppm的菲、芘和苯并芘的降解率分别可达到 86.62%,31.81%和22.18%; US6.1 2.在双向电泳(2D.E)分离差异表达蛋白前对Ⅳpentaromativorans 全蛋白提取和电泳过程中的主要影响因子进行了优化,结果表明:以变性剂为 8。000V时能获得理想的蛋白图谱; 3.通过功能蛋白组学分析和串联质谱鉴定,发现了在PAHs诱导下Ⅳ US6.1产生了的包含PAHs降解,转运和调节因子,碳代谢, pentaromativorans 氨基酸代谢,核苷酸代谢,特殊功能蛋白和未知功能蛋白在内的七大类功能蛋白; 4.根据环羟基化双加氧酶旺亚基和4.羟基苯甲酸3.单加氧酶的基因序列信 息设计特异性引物,采用反转录实时PCR分析发现这两个基因的表达在不同底 物诱导下均有不同程度的上调; US6.1在通过环羟基化双加氧酶开环后经一系列的 5.Ⅳpentaromativorans 酶作用后,经3.氧代乙二酸通路中的水杨酸或者邻苯二甲酸支路生成TCA循环 的中间代谢物进入TCA循环并最终降解成H20和C02。 关键词:高分子量多环芳烃,生物降解,蛋白质组学,基因表达,代 谢机制 Abstract aromatic eoneclassof Polycyclichydrocarbons(PAHs)alo玛anicpollutants,widely distributedinthe ale to mutagenic environment.Theycarcinogenic,teratogenic,and food an chain.Itis efficienttorecoverPAHscontamination livingorganismsby way microbialremediation.Itisa fieldtoconstructGenetic by hotspot Engineering of contaminated Microorganisms(GEMs)capablebioremediating environment, which 011theelucidationof and involvedin denpends genescorrespondingenzymes PAHs andthereforetheclarificationof

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