银杏内生真菌的分离及抑菌活性研究.pdfVIP

摘 要 植物内生真菌能够产生结构新颖、功能特殊的天然活性物质，是开发新型生 物源农药的宝贵资源，在农业中具有广泛的应用前景。本文从银杏树中分离筛选 得到 2株内生真菌，编号为 T­4 和 T­7，对几种重要的植物病原菌具有抑制作用， 对其进行了生物学特性测定和代谢产物抑菌活性研究。主要研究结果如下：  1.  采用组织分离法，从银杏的茎、叶片和根皮组织内分离得到26株内生真 菌。 通过对峙试验， 测定了 26株内生真菌对辣椒疫霉病菌 （Phytophthora capsici）， 番茄枯萎病菌  (Fusarium oxysporum)，苹果腐烂病菌  (Cytospora mandshurica)， 苹果炭疽病菌 （Colletotrichum gloeosporioides），梨黑星病菌(Venturia pirina)，小 麦赤霉病菌（Fusarium graminearum）6种植物病原菌的拮抗作用。结果表明 17  株内生真菌对 6种供试病原菌有不同程度的抑制作用。其中 T­4 和 T­7 菌株作用 较明显，对 6 种病原菌抑菌率均达到 50%以上，对苹果腐烂病菌均达到 90%以 上；T­7 对辣椒疫霉病菌的抑制率也达到 90%以上。T­4 对番茄枯萎病菌抑制率 则在 85%。  2.  内生真菌T­4 和 T­7 的分类鉴定结果显示二者同为镰孢属 （Fusarium sp.）,   其中 T­7经分子生物学鉴定为为腐皮镰孢菌(Fusarium solani)。 生物学特性研究测 定了不同温度、光照、酸碱度及碳源、氮源和培养基条件下两株菌的生长情况。 试验结果表明两株菌生长的适宜温度范围在 28℃­32℃；T­4  和 T­7 菌株分别适 合在 pH 值为 7­9和 6­10范围内生长；葡萄糖和麦芽糖是 T­4 菌株生长的最适碳 源， 乳糖是 T­7 的最适碳源；T ­4 菌株生长适用的氮源是胰蛋白胨，T ­7为硝酸钠；  PDA 或 PSA 是 T­4 菌株生长的适宜培养基，牛肉膏培养基对于 T­7 更为适用； 两者皆不受光照条件影响。  3.  采用抑制菌丝生长速率法测定了 26株内生真菌代谢产物的抑菌作用。经 摇瓶发酵得到的菌丝，用乙酸乙酯萃取，得到的粗提物在 200mg/L 浓度下对供 试病原菌的抑制作用较弱。发酵液对 6 种供试病原菌抑菌活性测定发现，T­4 和  T­7 菌株发酵液表现出对苹果腐烂病菌、苹果炭疽病菌、梨黑星病菌和小麦赤霉 病菌和番茄枯萎病菌的抑制作用， 对苹果腐烂病菌的抑制率分别达到 90%和 85%  以上。二者对辣椒疫霉病菌都没有表现出抑制作用。检测 T­4、T­7 菌丝发酵液 在辣椒幼苗上的抑菌作用， 结果表明 T­7发酵液对感染辣椒疫霉的幼苗有 23.17%  的保护作用和 15.43%的治疗作用，表现出一定的防治效果。 关键词：银杏，内生真菌，抑菌活性，代谢产物 I  Abstract  The plant endophytic fungi metabolize some interesting secondary metabolites  with novel structures and distinctive activities, which are important sources of new  biopesticide, and have extensive prospects in agricultural application. This research  obtains  endophytic  fungi  T­4  and  T­7  from  Ginkgo  biloba  L,  which  strikingly  antagonized kinds of plant pathogens. In this present paper，biological characteristics  and  antimicrobial  activities  of  the  strains  were  studied.  The main  results  are  as  follows:  1. Twenty­six endophyte isol