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应用IP—RP—HPLC法研究磷酸肌酸在小鼠体内的 药代动力学及代谢处置 硕士生姓名： 徐 蕾 指导教师： 孙慧君教授 专业名称： 药理学 摘 要 目的：(1)建立一种离子对反相高效液相色谱法(IP—RP—HPLC) 同时测定小鼠血浆和心肌中磷酸肌酸(PCr)及其代谢产物肌酸(Cr)以 及相关ATP的浓度，为外源性PCr药代动力学和代谢处置研究提供生物 分析方法学。(2)研究PCr静注给药后的代谢处置和代谢物动力学。(3) 研究Cr静注给药后的代谢处置和代谢物动力学。 (4．6x250mm，5 铵混合溶液(PH N 溶液以1 NaOH调PH7．5(B)，以及甲醇(C)组成。梯度洗脱：O～ 8min(1 OO％A，lmL／min)_÷8～l0min(85％B+15％C，1．2mL／min) C，1．3mL／min)叶20～29min(80％B+20％C，1．3 (100％A，1 nm(ATP、 mL／min)。测定波长为210nm(PCr、Cr)、260 TMP)。血浆以及心肌样品的预处理采用6％高氯酸沉淀蛋白，离心后的 上清液立即以K2C03中和至中性。以上操作均在冰浴低温下进行，以防 PCr降解。选用甲氧苄啶(TMP)为内标，以峰面积比内标法定量，以 基线扣除法计算外源性PCr、Cr和相关ATP。药代动力学研究中，小鼠 静注给药后不同时间采血分离血浆，经预处理净化后采用IP—RP— HPLC法分析；代谢处置研究中，小鼠静注给药后不同时间取心脏并匀 浆，经预处理净化后采用IP—RP—HPLC法分析。测定上述样品中PCr、 Cr和ATP浓度。计算有关药代动力学参数和转化分数等。 结果：在上述色谱条件下，血浆及心肌中PCr、Cr、ATP及TMP均 达基线分离，且不受空白基质的干扰，PCr、Cr、ATP及TMP的t，值分 别为6．2、2．9、28．8和17．3rain，PCr在1～7500 lxg／mL(血浆)、7．5～ 750 500 I-tg／mL 119／mL(心肌)，Cr和ATP在l～1lag／mL(血浆)、7．5～750 S9．07％和S9．20％(心肌)。准确度在95．96--101．89％(血浆)和94．27， l02．99％(心肌)；在血浆和心肌的回收率均90％。方法学验证表明该 1000 法特异性强，精密度和准确度高，符合国家药监局要求。静注PCr mg／kg后，血浆中的PCr消除符合二室模型一级动力学，消除半衰期tl／211 为22．9525．35min；表观分布容积Vd为0．960．98 L／kg；清除率CL 为0．028 类似血管外给药一室模型、一级动力学，其达峰时间tmax为5min；消除 1．6～53．8min，较原药PCr的消除半衰期长；由分别静 半衰期tl／2k(m)为5 1000 为72．．21％。小鼠静注PCr mg／kg后心肌中未测出PCr，但测出Cr 达峰值时间tmax为90rain。小鼠 ATP的tl／2k(m)为685．46700．54min； 静注合成代谢物Cr 中未测出高于本研究最低检测水平的ATP,且PCr的浓度较空白血浆中内 源性PCr的浓度未有增加。血浆中的Cf消除符合二室模型一级动力学， 其消除半衰期、MRT均与给予PCr后生成的代谢物Cr的消除半衰期和 MRT基本一致。小鼠静注合成代谢物Cr 等克分子)后心肌中未测出高于本研