ctb基因和cb-ureb融合基因水稻表达载体的构建及其转化.pdfVIP

浙江大学医学院 病原生物学 Ol级硕士研究生 姜云水 导 师 方平楚教授 摘 要 自从1983年第一个转基因植物问世以来，植物基因工程的发展日新月异，在植物抗病毒、抗虫、 抗除草剂、抗逆性品种改良和外源基因表达等方面取得了举世瞩目的成就，转基因植物作为廉价的生 物反应器生产人类所需要的各种药物原料展示了诱人的前景。水稻是世界上最重要、种植范围最广的 粮食作物。当今，以水稻为代表的禾本科植物的转基因技术取得了重大突破，水稻表达异种蛋白成为 可能。通过转基因技术，以水稻为表达系统生产安全和廉价转基因疫苗、抗体、乃至细胞因子，不仅 是医药基因工程研究的进步，也是使水稻从简单的粮食作物转变为具有高附加值的功能性食品的重要 途径。 幽门螺杆菌(Helicobacter I 列为与胃癌发生密切相关的病原菌，认为是人类第1类致癌原(Group 将是预防Hp感染的最有效方法。 本研究拟通过植物转基因技术，将Hp 定遗传的再生植株，为建立以水稻为生物反应器表达微生物抗原及其I{p转基因植物疫苗的研究奠定 基础。 方祛 进行DNA序列分析验证。 2．构建CTB-ureB融合基因的水稻表达载体pCWUN： 基因插入载体pUCl9，PCR筛选、酶切鉴定阳性克隆，进行DNA序列分析验证。 5， l 和3，引物72 pCA2耀3IAl300，舞选、鍪定耋缀囊黢pcwuN。 3．水稻表达载体pl 定，获褥撮癌±壤轷萤转德予。 4．水稻幼胚诱导胚性愈伤组织，然后根瘤土壤杆菌舟导表达裁体p13W4-CTB转化水稻胚性愈伤 缝缀，经过抗性筛选、分纯粒生根培养获得转基因植橡，PCR鉴定转基因搬株。 缝果 扦菌。 3．PCR分橇证实永稻幼蓓的染色休DNA中穗经整合了CTB萋困。 结论 1．成功构建了水稻表达栽体p13W4一CTB和pWCUN，并经序列分析证实序，Ⅱ无误。 2．求稻表这载髂plSW4一CT8窝pWCUN残葫转纯辍瘿±壤轾菠。 3．根瘤土壤杆菌成功介搏p13W4一CTB转化水稻，获得转基因植株。 多≤蘩I词：植物转基因、HpureB基魏、CTB旗因、承鞘表达载体、融台麟鲻 2 The constructionandtransformofrice vectorof exprossion CTB andCTB—。ureBfus gene ion gene MedicineSchool ofZhejiang UniversityPathogenicBiology Grade 01 Yimshui Postgraduate Jiang SupervisorProfessor FangPingchu Abstract