应用抑制性消减交技术克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白ns3反式激活的相关基因.pdfVIP

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2016-03-09 发布于贵州
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应用抑制性消减交技术克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白ns3反式激活的相关基因.pdf

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应用抑制性消减交技术克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白ns3反式激活的相关基因

缩略语英文缩略语词表英文缩写英文全名中文译名 SSH subtractive suppression 抑制性消减杂交 hybridization HCV Cvirus HepatitiS 丙型肝炎病毒 NS3 noflstFuerural 3 protein 非结构蛋白3 RDA difference representational代表性差异分析法 analysis bp basepair 碱基对 PeR chainreaction Polymerase 聚合酶链反应 PBS bufferedine phosphate sal 磷酸盐缓冲液 SDS Sodium dodecylsulfate 十二烷基磺酸钠 EB EthidiumBromide 溴化乙锭 EDTA EthylenendinitrolotetraacetiC 乙二氨四乙酸 acid OD optical density 光密度 DTT dithiothreitol 二硫苏糖醇 cDNA DNA complementary 互补DNA RT—PCRreverse PeR transcription反转录PCR DMSO de sulfoxi Dimetbyl 二甲基亚砜 B1ASTBasicalLocal AIignment 基本局部比搜索工具 SearchTool 摘要应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活的相关基因摘要目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术，构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白3(NS3)反式激活的相关基因cDNA消减文库，克隆HCVNS3反式激活相关基因。／ (方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增HCVNS3基因，并将＼其克隆至真核表达载体pcDNA3．1(一)中，构建成含有1893bp目的基因的质粒pcDNA3．1(一)-NS3。转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞，以空载体DcDNA3．1(一)为对照，制备转染后的细胞裂解液，提取 mRNA并逆转录为cDNA，经RsaI酶切后，将实验组cDNA分成两组，分别与两种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行两次