质粒提取、定量与酶切鉴定课件.pptVIP

琼脂糖凝胶 琼脂糖凝胶的制备 上样：加样前，样品先与6×上样缓冲液混匀 电泳 ：电压100v；30min 结果观察：凝胶成像仪　 向电泳槽中加入0.5×TBE电泳缓冲液，越过凝胶表面即可； 轻轻拔出固定在凝胶中的梳子； 样品准备：向核酸样品中加入约为样品体积1/6的上样缓冲液，用加样器轻轻混匀； 上样：用加样器吸取样品，轻轻的加入到凝胶的样品孔中，加样量为6 μl ； 盖上电泳槽，接通电源，开始电泳； 电泳条件：电压80v；时间25～30分钟； 电泳结束后，切断电源，取出凝胶。 电泳结果分析：紫外检测仪直接观察电泳条带 13. 取出凝胶，置于凝胶成像仪中观察结果，并拍照记录。 琼脂糖凝胶电泳上样 1：DNA Marker（ 5 ?l ） 2：提取的质粒DNA （ 5 ?l ） 3：质粒DNA酶切产物 （ 10 ?l ） + - 1 2 3 4 每组上2个样品 DNA Marker (ladder) 　 Loading Buffer上样缓冲液 EDTA 甘油 ……………增大溶液密度 溴酚蓝…………指示剂 二甲苯胺蓝……指示剂 组成 0.5TBE, 0.5-1.4%浓度的胶中， 迁移率 溴酚蓝=300bp 二甲苯胺蓝=4kbp 染色 溴化乙锭(Ethidium　Bromide，E