肺炎衣原体IgM检测试剂盒.docVIP

肺炎衣原体IgM检测试剂盒 用途：肺炎衣原体IgM盒采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测人血清中CPAb—IgM。 本试剂适用于肺炎衣原体感染的早期诊断。仅供体外诊断。 介绍： 肺炎衣原体（TWAR组）感染后会引发上、下呼吸道炎症，如咽炎、鼻窦炎、急性支气管炎等。但多数人症状较轻或无症状，不加治疗和延缓治疗的病情会严重。肺炎衣原体感染者血清检测阳性结果表明儿童含量较低，随年龄逐渐增加，在中年达到最高。样本的采集和患者适时的血清学检验会影响到检验结果。一般情况血清IgM在肺炎衣原体感染后2---4周出现，然后IgG和IgA在6----8周出现。IgM一般在2---6个月后完全消失。IgG通常缓慢减少。IgM是早期诊断的依据。 实验原理： 将肺炎衣原体包被于微孔板→加入血清,使得抗原抗体结合→37℃育温1小时→洗去未结合的抗体→加入酶结合物→37℃育温1小时→洗去酶结合物→加入底物→加入终止液450nm→读取吸光值→结果计算 实验流程：2×50ul阴性对照、1×50ul阳性对照和稀释后的样本加入到微孔板里→37C育温1小时→洗液洗涤3次→加入50ulHRP酶结合物→37℃育温1小时→洗液洗涤3次→加入100ulTMB底物→室温平衡15分钟→加入100ul终止液→450nm读取吸光度→计算结果 试剂盒组成： 1、包被肺炎衣原体的微孔板 1×96 2、浓缩洗液（20倍稀释） 100ml 3、样本稀释液（红盖） 60 ml 4、酶稀释液（绿盖） 40ml 5、阴性对照 1.25ml 6、阳性对照 0.75ml 7、酶结合物 0.2ml 8、底物 14ml 9、终止液 15ml 10、封膜 1张 11、说明书 1份 所需其他材料： 1．干净工作台 2．用于稀释酶结合物的塑料桶 3．移液器5-50ul、50-200ul和200-1000ul及吸头若干 4．1L的容量瓶 5．50ul的量筒 6．洗瓶 7．吸光度值 8．振荡器1个 9．37℃恒温箱1个 10．酶标仪1个 11．蒸馏水 注意事项： 本品仅供体外诊断使用。 1．本试剂盒生物学安全性遵照FDA/CE推荐方法检测HBV/HCV/HIV1/HIV2均阴性。 2．底物对皮肤和粘膜有损害避免接触。 3．在有效期内使用本试剂盒，不同批次的试剂盒禁止交叉使用。 4．终止液对眼睛和皮肤有损伤，一旦溅入眼睛，用大量清水冲洗并遵循医嘱。 储存条件： 1．试剂盒2～8℃保存，试验完毕立即放入冰箱，禁止冰冻。 2．试剂盒一旦拆封，务必于90天内用完。 3．洗液现配现用，如一次性配完，2～8℃保存21天。 4．标本2～8℃可以保存7天，如需保存7天以上，则需-20℃保存。 操作步骤： 试剂准备： 1．所有试剂使用前混匀并平衡至室温。 2．洗液20倍稀释：如50ul浓缩洗液加入950ml水。酶结合物1:300稀释（如10ul加入300ul的稀释液）。 3．血清样本1:105稀释，如加入5ul的血清，加520ul的样本稀释液，或者采用两步法稀释，加入10ul病人血清，加入200ul样本稀释液，取出该稀释后的溶液25ul，再加入100ul的样本稀释液（阴性、阳性和标准品按以上比例稀释）。 4．每孔加入50ul的稀释后的液体（空白孔加入样本稀释液）。 5．封膜后，37℃育温1小时，拍干液体。 6．用稀释后的洗液每孔300-350ul洗涤3次。 7．拍干后加入酶结合物的稀释液50ul。 8．封膜后，37℃育温1小时，拍干液体。 9．重复第6步。 10．加入100ul底物，室温放置15分钟。 11．加入终止液100ul。 12．30分钟内检测450/620nm检测吸光度。 检测的有效性： 检测结果必须符合下列条件，否则重新测试。 1．阳性对照吸光度值必须≥0.8（450nm读取吸光度） 2．阴性对照的平均值必须0.1＜NC≤0.4（450nm读取吸光度） 结果计算： 样本的吸光值（COV）和吸光指数(COI)的换算： COV等于NC×2 NC=两个阴性孔的吸光度的平均值。 COI = 450nm血清样本的吸光度值 COV 表1：结果判断 吸光度值450nm COI 结果 诊断说明 OD＜1.4×COV ＜1.4 阴性 未感染肺炎衣原体 1.4×COV≤OD≤1.5×COV 1.4～1.5 临界值 可能感染，建议2～4周后重新复查 OD＞1.5×COV ＞1.5