生物显微镜技术7-电子显微镜及其应用.ppt

一、电镜技术的发展和在生物学中的应用 人眼睛的分辨力0.2mm 光学显微镜的分辨极限是0.2μm，有效放大倍数最高不超过2000倍。 到1890年，光学显微镜的分辨本领——能够分辨清楚物体上两点之间的最小距离，已经达到了极限。 以电子束作为照明源的电子显微镜突破了光学显微镜由于光波的衍射效应所限制的分辨极限 电子显微镜分辨率可高达0.2nm，能将结构放大几万倍、几十万倍、甚至上百万倍。电镜下所观察到的结构称亚 （超）微结构，统称为电镜结构。 （一）电镜技术的发展 1924年，法国物理学家De Broglie发现电子束与光一样也具有波动性质。 1926年，德国物理学家Busch奠定了利用磁场作为电子透镜的理论基础。 1932年德国年轻的大学生鲁斯卡发明创制了第一台透射电子显微镜实验装置，并终于在1938年成功研制了世界上第一台真正的透射式电子显微镜(TEM) ，被誉为电镜之父，1986年获诺贝尔奖 。 1939年，德国Siemens公司生产了第一台作为商品用的透射电镜。 1942年，英国科学家M.Mullah研制出了第一台扫描电子显微镜 1986年，宾尼格和罗雷尔先后研制成功扫描隧道电子显微镜(STM)和原子力电子显微镜(AFM) 20世纪50年代到60年代，电镜发展很快，从性能到构造都得到了极大的改进，特别是分辨本领得到大幅度提高，达到1nm左右，到80年代的分辨力已达到0.1nm，最新研制的超高压透射电镜的分辨力已达到0.005nm。 我国1958年试制成功了第一台10万倍电子显微镜，经过多年的研究，现在试制出厂的DXB2-12型电镜的晶格分辨本领为0.204nm, 放大倍率最高达80万倍。 （二）生物电镜技术在生物学中的应用 1、细胞学：细胞超微结构 2、病毒研究和诊断：发现病毒 3、超微结构病理诊断：生物体发生疾病都会导致细胞发生形态和功能上的改变，通过对病变区细胞的电镜观察就可以为疾病诊断提供有力依据。如肾活检、肿瘤诊治、血液系统疾病诊断、肌肉活检。 4、寄生虫学领域中的应用：寄生虫超微结构的观察及功能的研究、寄生虫病诊断的研究、寄生虫与宿主相互作用的研究、寄生虫药物作用机制的研究、在寄生虫的凋亡和疫苗方面的研究等 二、电子显微镜的基本结构和原理 与光镜相比,电镜用电子束代替了可见光，用电磁透镜代替了光学透镜并使用荧光屏将肉眼不可见电子束成像。 电子与物质相互作用会产生透射电子、弹性散射电子、能量损失电子、二次电子、背反射电子、吸收电子、X射线、俄歇电子、阴极发光和电动力等等。电镜就是利用这些信息来对试样进行形貌观察、成分分析和结构测定的。 透射电子：直接透射电子，以及弹性或非弹性散射的透射电子用于透射电镜(TEM)的成像和衍射。 电子束穿过样品以后，带有样品之中关于微结构及组成等方面的信息，将这些信息进行处理，便可得到所需要的显微照片及多种图谱。 透射电子显微镜是通过穿透样品的电子束进行成像的放大设备。 一束电子射到试样上，电子与物质相互作用，当电子的运动方向被改变，称为散射。 (一)透射电镜(TEM)的基本结构、原理 Transmissim Electnonic Microscopy 透射电镜和光学显微镜最基本的原理是相同的，显微放大过程基本相似，电镜的光路和部件术语基本一样。不同的是，电镜的照明源不是可见光而是电子束；透镜也不是玻璃而是轴对称的电场或磁场，电镜的总体结构、成像原理、操作方式等与光学显微镜有着本质上的区别。 透射电镜，是把经加速和聚集的电子束投射到非常薄的样品上，电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度相关，因此可以形成明暗不同的影像 通常，透射电子显微镜的分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万～百万倍，适于观察超微结构。 透射电子显微镜在材料科学、生物学上应用较多。 由于电子易散射或被物体吸收，故穿透力低，样品的密度、厚度等都会影响到最后的成像质量，必须制备更薄的超薄切片，通常为50～100nm。 用透射电子显微镜观察时的样品需要处理得很薄。常用的方法有：超薄切片法、冷冻超薄切片法、冷冻蚀刻法、冷冻断裂法等。 1、基本结构 透射电镜由电子光学系统、真空系统和电子学系统三大部分组成。 1)电子光学系统 电子光学系统即电镜的镜体，基本上是一个电子透镜系统，一端是电子源，另一端是观察和记录系统，中间是安装样品的装置。 透射电子显微镜 电子光学系统 （1） 照明系统　由电子枪和聚光镜组成。其作用是为成像系统提供一个亮度高、尺寸小、高稳定的照明电子束。 电子枪是电镜的照明源，由灯丝(阴极)、栅极 (或称韦氏圆筒)和加速阳极组成。加热灯丝发射电子束。在阳极加电压，电子加速。阳极与阴极间的电位差为总的加速电压。经加速而具有能量的电子从阳