铜(Ⅱ)含量的酶法测定.pdfVIP

第28卷第9期 分析试验室 VoI．28．No．9 20Y)年9月 ChineseJournalofAnakrsisI—gffatorv 2()()9—9 铜(Ⅱ)含量的酶法测定 何进星，王苗，柳畅先★ (中南民族大学化学与材料科学学院，分析化学国家民委重点实验室，武汉430074) 摘要：基于乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸生成丙酮酸的反应中铜离子对酶的抑 制作用原理，通过测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)吸光度的变化率 得出其酶促反应速度，对应于铜离子浓度而制得标准曲线。检出限为 3．8p．mol／L。讨论了pH、温度以及共存组分对测定的影响。 关键词：铜(Ⅱ)；酶法测定；动力学光度法；乳酸脱氢酶 中图分类号：0657．3文献标识码：A 文章编号：!000-0720(2009)09．106-03 铜是人体必需的微量元素，但过量摄人则会 产生危害，铜对水生生物的影响较大。铜的毒性 型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂)，CS．501型 与其形态有关，游离铜离子的毒性比络合铜大。 超级恒温水浴槽(武汉实验仪器厂)。 因此铜(Ⅱ)含量是食品试样和水质监测的重要指 铜(11)标准储备液(0．100mol／L)：称取 标。测定铜(11)的方法有原子吸收分光光度法、0．6242 gCuS04-5H20，加水溶解，转移至25mL容 分子吸收分光光度法、阳极溶出伏安法、示波极 量瓶中定容。其它浓度标准液均用此溶液稀释。 谱法等【1]。近年来酶法在分析测定方面的应用研 乳酸(9．4mol／L，经标定)，NAD(0．05mol／L)。 究很活跃，该方法可测定在酶促反应中作为底物、 三羟甲基氨基甲烷(Tris，0．05mol／L)．HCI．水合肼 辅酶、激活剂和抑制剂而存在的物质【2刊。 缓冲溶液，LDH(12 ms／mL)，茶叶(湖北巴东金果 本文基于LDH催化下列反应：乳酸+NAD甘 坪茶叶公司，2008—6—7出品)。 NADH+丙酮酸，式中NAD和NADH分别为氧化 1．2实验方法 及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。抑制剂铜离子 1．2．1试样处理称取茶叶试样10 g于坩埚中， 的存在使LDH的活力显著降低，所以NADH吸光 置于电炉上碳化2h后，转入马弗炉中，500℃灰 度的变化率与铜离子的浓度有关。无论抑制剂类 化5 4 1 h。冷却后加入浓HNq mL，在 mL，HCl04 型是属于竞争抑制、非竞争抑制或反竞争抑制， 电炉上加热至白烟将尽时，加人1mL删q，蒸 抑制剂的浓度与酶促反应速度的倒数总是呈直线